原理1:單克隆抗體(MAb)與抗血清(又稱(chēng)多克隆抗體，PAb)*主要的區別是MAb為單一種B細胞克隆所產(chǎn)生的一種均一的免yi球蛋白分子。所以MAb是B細胞克隆的標志，是一種獨特型的抗體，它的特異性是針對一個(gè)抗原決定簇的。制備單克隆抗體不能用化學(xué)分離的方法從多克隆抗體中去分離純化得到它，而是用分離產(chǎn)生抗體的B細胞克隆的方法得到它。為了使B細胞克隆能在體外人工培養下長(cháng)期存活并產(chǎn)生完全均一的MAb，G.KÖhler合Milstein于1975年創(chuàng )立了雜交瘤方法。所以制備單克隆抗體的技術(shù)又稱(chēng)雜交瘤技術(shù)(hybredoma technique)。
雜交瘤技術(shù)的基本原理是用分泌抗體但不能長(cháng)期培養的B細胞與能在體外長(cháng)期培養并可低溫保存的腫瘤細胞進(jìn)行雜交。篩選得到的雜交瘤細胞應該是既能分泌抗體又有瘤細胞的特性，可長(cháng)期傳代培養，又可在液氮中保存的細胞。把這些細胞單克隆化，用單克隆化的雜交瘤細胞進(jìn)行單克隆抗體的生產(chǎn)。
原理:*常用的單克隆抗體是小鼠的單抗，此外也有大鼠的和人源的單抗。人源單抗制備比較復雜。小鼠單抗的制備通常是使用Balb/c小鼠的B細胞和它的骨髓瘤細胞。大鼠的單抗制備通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤細胞。B細胞是從免yi動(dòng)物的脾臟中分離出來(lái)的。動(dòng)物免yi方法與抗血清制備相同，只是在制備脾臟前3d必須進(jìn)行一次靜脈加強注射以保證得到的B細胞有旺盛的分泌抗體的活性。骨髓瘤細胞有許多細胞株是經(jīng)過(guò)誘變和篩選得到的缺陷型。篩選的標準是
①瘤細胞本身不產(chǎn)生抗體或者產(chǎn)生抗體的某種鏈，但不能分泌;
②是次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤核苷酸轉移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(TK)的缺陷型。因為這種缺陷型的瘤細胞正常的核酸合成途徑被氨基喋吟(aminopterin)阻斷后，由于缺失這些酶，即使補充它的底物次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)，核酸合成的旁路也不能起到救援的作用，結果導致瘤細胞死亡。而雜交瘤細胞因帶有B細胞的全套基因，在HAT存在的條件下借助于HGPRT和TK的作用通過(guò)替代的核酸合成途徑能正常合成DNA和RNA。所以雜交瘤能正常地生長(cháng)繁殖而被選擇出來(lái)。未被融合的游離的B細胞只能存活3d而后自行死亡。這就是用HAT培養基進(jìn)行選擇的原理。