蛋白電泳流程：
1、組裝SDS-PAGE：將配制好的SDS-PAGE膠組裝在Western-Blotting電泳系統中(注意厚玻璃板稍高、靠外放置，薄玻璃板稍矮、靠?jì)确胖?，水平放置時(shí)厚板在下、薄板在上記為正面）；
2、蛋白上樣：加入電泳緩沖液，每孔上樣量為10-20 μL（蛋白總量10-20ug即可），蛋白marker上樣3-5 μL（注意保證上樣體積盡量一致，否則可能導致蛋白條帶不在同一水平線(xiàn)；上樣時(shí)可用10 μL移液器緩慢滴加，切忌快速吹打以免引起蛋白樣品溢出，此外，上樣體積好不要接近上樣孔的總體積，筆者經(jīng)驗10孔板每孔上樣體積不宜超過(guò)40 μL，15孔板上樣體積不宜超過(guò)25 μL；當然，上樣孔的總體積大于上述數值）；
3、接通電源、開(kāi)始電泳：80 V電泳50 min，待蛋白marker到達分離膠改用120 V電泳2 h至蛋白marker到達分離膠底部，停止電泳（電泳參數不同實(shí)驗室習慣不一，也可一段式即無(wú)需調整電壓；大多數實(shí)驗室多采用兩段式：低電壓80V左右緩慢電泳壓平樣品，稍高電壓120V左右快速分離分子量不同的蛋白）；
tips：一般來(lái)說(shuō)電泳液 好現配現用，方便糾錯；但是大多數研究者的經(jīng)驗式，電泳液可反復使用，內槽一般選用新鮮電泳液，外槽可選用回收電泳液，外槽電泳液高度一般無(wú)特殊要求，有的研究者習慣外槽電泳液高度顯著(zhù)低于內槽電泳液高度，造成所謂“電勢差”，筆者經(jīng)驗這種電勢差對電泳時(shí)間和WB結果無(wú)明顯影響；此外，有研究者會(huì )疑惑電泳液可重復使用多少次，筆者經(jīng)驗是n次，n≥10，均不影響實(shí)驗結果。