實(shí)時(shí)熒光定量 PCR (RT-qPCR) 是一種用于實(shí)時(shí)擴增和檢測特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物學(xué)技術(shù)。
RT-qPCR原理的三個(gè)主要步驟：
1 反轉錄：
?使用逆轉錄酶和特定引物將RNA樣品反轉錄成cDNA。
?該步驟將RNA模板轉化為更穩定且可擴增的DNA形式。
?反轉錄過(guò)程中使用特定引物。
2 PCR擴增：
?使用特定引物對cDNA進(jìn)行PCR擴增，這些引物環(huán)繞目標區域。
?PCR是一個(gè)循環(huán)過(guò)程，呈指數級擴增DNA模板的數量。
?PCR反應中包含熒光染料或探針，它們結合到擴增的DNA序列上并發(fā)出熒光信號。
3 熒光實(shí)時(shí)檢測：
?使用實(shí)時(shí)PCR儀器實(shí)時(shí)監測熒光信號。
?熒光的數量與每個(gè)PCR循環(huán)中擴增的DNA數量成比例。
?使用專(zhuān)業(yè)軟件分析數據以確定循環(huán)閾值（Ct）值，該值表示熒光信號達到特定閾值水平所需的循環(huán)數。Ct值用于計算原始樣品中存在的目標DNA量，從而允許進(jìn)行基因表達或病毒載量等定量分析。