HPLC是目前檢測細胞分裂素zui常用的方法之一,適用于植物組織、水培液等樣品中的細胞分裂素分析。
檢測步驟:
1、樣品提?。?/b>
取新鮮植物組織(如根尖、莖尖等),迅速在液氮中冷凍并研磨成粉末。使用甲醇、氯仿和甲酸的混合溶液(如12:5:3)進(jìn)行勻漿,離心后提取上清液。通過(guò)減壓濃縮去除有機溶劑,得到細胞分裂素粗提取物。
2、樣品純化:
使用正丁醇在弱堿性條件下抽提細胞分裂素。通過(guò)離子交換柱層析(如磷酸纖維素柱)或分子篩柱(如LH Sephadex柱)進(jìn)一步純化。
3、HPLC分析:
色譜條件:通常使用C18反相色譜柱,流動(dòng)相為乙腈-三乙胺緩沖液,梯度洗脫,柱溫35℃,檢測波長(cháng)270nm。標準曲線(xiàn):使用玉米素、玉米素核苷等標準品繪制標準曲線(xiàn),計算樣品中細胞分裂素的含量。
4、結果計算:
根據色譜峰面積和標準曲線(xiàn),計算樣品中細胞分裂素的濃度,并考慮回收率以校正數據。