PCR 成功的概率，良好的引物設計對 PCR 擴增的成功至關(guān)重要。當您開(kāi)始設計引物時(shí)，應仔細考慮以下幾個(gè)原則：
1、引物的長(cháng)度。PCR引物一般在18-22bp左右。這對于引物特異性和在退火溫度下的結合來(lái)說(shuō)是足夠長(cháng)的。
2、熔化溫度(Tm)。Tm 定義為在此溫度下，DNA 雙鏈體的一半將解離成單鏈 DNA。52-58C 范圍內的引物 Tm 是zui佳的。
3、GC 含量。zui 佳 GC 含量應為 40-60%。
4、許多軟件可用于引物設計。例如primer5和Oligo。這些軟件推薦的引物通?？梢詽M(mǎn)足我們的需求。