細胞是生物體的結構和功能的基本單位生物學(xué)名詞。一般具有細胞核、細胞質(zhì)和細胞膜。植物細胞的細胞膜外還有細胞壁。體形極微,在顯微鏡下始能窺見(jiàn)。形狀多種多樣,主要由細胞核與細胞質(zhì)構成,表面有薄膜。動(dòng)植物細胞結構大致相同。植物細胞質(zhì)膜外有細胞壁,細胞壁中常有質(zhì)體,動(dòng)物細胞質(zhì)中常有中心體,而高等植物細胞中則無(wú)。細胞有運動(dòng)、營(yíng)養和繁殖等機能。細胞是許多生物學(xué)實(shí)驗的主角。如果細胞心情不好,那么實(shí)驗的結果也不會(huì )好到哪兒去。如何讓細胞快樂(lè )?下面詳述:
1. 確保所有實(shí)驗室材料都無(wú)菌
交叉污染是細胞培養的大敵。即使是zui輕微的污染,也可能毀了幾個(gè)星期的成果。因培養箱內溫暖潮濕,真 菌極易生長(cháng),因此必須注意定期清潔。此外,在將培養瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺之前,應用酒精擦拭干凈,以避免污染。
2. 在使用前正確解凍細胞
盡管解凍看起來(lái)是個(gè)簡(jiǎn)單的步驟,但必須操作得當,以免傷害細胞。長(cháng)時(shí)間暴露在高溫條件下會(huì )使細胞無(wú)法鋪板。因此,凍存管應當在37°C水浴中放置2分鐘,然后用條件培養基稀釋?zhuān)员苊釪MSO造成直接傷害。
3. 小心處理您的培養物
細胞培養的脆弱性怎么強調也不為過(guò)。劇烈搖晃,或連續的溫度波動(dòng)可能會(huì )對生長(cháng)產(chǎn)生不利的影響。確保培養箱是水平的,溫度均一,且遠離電動(dòng)儀器。此外,盡量避免一次處理多個(gè)細胞系,因為它可能會(huì )影響細胞的基因型和表型。您還應定期完成STR圖譜分析,以確認細胞系的身份。
4. 使用對數生長(cháng)期的細胞
細胞培養過(guò)程共有3個(gè)階段:停滯期、對數期和平臺期,分別代表了低細胞生長(cháng)、高細胞生長(cháng)和無(wú)細胞生長(cháng)。zui有活力的細胞是健康的,快速分裂的,在對數期以70-80%的匯合度存在。
5. 在傳代之前不要讓細胞匯合
匯合度是指貼壁細胞占據培養瓶表面積的比例。*匯合意味著(zhù)100%的表面都被貼壁細胞覆蓋。一定要避免這種狀態(tài),因為它意味著(zhù)細胞不能繼續生長(cháng)。不過(guò),當務(wù)之急是使用活躍生長(cháng)的細胞。
6. 選擇zui 佳的培養基開(kāi)發(fā)策略
在細胞培養過(guò)程中,培養基是控制產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和成本的zui重要因素。必須針對每種培養物來(lái)定制培養基,以?xún)?yōu)化實(shí)驗結果。在決定以哪種方式來(lái)開(kāi)發(fā)您的培養基時(shí),您有幾個(gè)選擇。您可以購買(mǎi)現成的,自己開(kāi)發(fā),也可以與另一家公司合作開(kāi)發(fā)特定的培養基。在這個(gè)過(guò)程中,您需要考慮時(shí)間和成本等因素。