細胞凋亡實(shí)驗方法過(guò)程:
1、三尖杉酯堿誘發(fā)HL-60細胞凋亡
(1)實(shí)驗前約24小時(shí),接種兩瓶HL-60細胞,標記①、②,每瓶含約6ml培養液,置37℃,5%CO2培養箱培養。
(2)實(shí)驗前約2.5小時(shí),當細胞密度達到70%,①號瓶加入三尖杉酯堿200μl,使終濃度為1μg/ml,②號瓶中加入同等量PBS(pH7.4)作對照。共同放入培養箱中繼續培養2.5小時(shí)。
2、Ho33342和PI雙重染色鑒別三種細胞
(1)染色:將瓶中的細胞搖勻取200μl于1.5ml的離心管中,加入Ho33342母液2μl,PI 20μl,染色15分鐘。
(2)滴片:取一載玻片用雙面膠圍成一小室,從離心管中各取以上染色后的細胞懸液10μl,加入小室內蓋上蓋玻片,熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀(guān)察,區別三種細胞,并注意三者比例。
六、注意事項
1、誘導培養HL-60細胞時(shí)間要準確;
2、熒光顯微鏡下觀(guān)察細胞時(shí),由于熒光易碎滅,觀(guān)察時(shí)要盡量快。