ELISA實(shí)驗中外源性干擾因素包括標本溶血、標本被xi 菌污染、標本保存時(shí)間過(guò)長(cháng)和標本凝固不全等。
1、標本的溶血血紅蛋白中含鐵血紅素有類(lèi)過(guò)氧化物酶的活性，因此，在以辣根過(guò)氧化物酶(HRP)為標志的ELISA測定中，如血清樣本中血紅蛋白濃度較高，則很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。所以在采血時(shí)應注意手法，采集的血液勿用力振蕩，嚴防標本溶血。
2、標本的污染菌體可能含有內源性辣根過(guò)氧化物酶，可使實(shí)驗出現非特異性顯色。因此，ELISA檢測宜采集新鮮標本，如不能當時(shí)測定，5 d之內應4℃保存，1周后檢測應低溫凍存；同時(shí)，收集標本采用無(wú)菌試管，可防止標本的污染。
3、標本的保存標本在冰箱中保存過(guò)久，血清中IgG可聚合成多聚體，AFP可形成二聚體，在用間接法測定中會(huì )導致本底過(guò)深，甚至造成假陽(yáng)性。 冰凍保存的標本反復凍融產(chǎn)生機械剪切力對標本中的蛋白等分子有破壞作用，可引起假陰性結果。因此，ELISA檢測盡量采用新鮮標本，長(cháng)時(shí)凍存的樣本避免反復融凍[3]。
4、標本凝固不全凝固不全的血清中含有部分纖維蛋白原，可使結果呈假陽(yáng)性。解決的方法有：
①于采血管中加入適當的抗凝劑；
②將采集后的血液放在架子上再放入37℃水浴中1 h，待充分凝固后再離心分離血清