血清樣本處理:
1、血清細胞培養上清
血清細胞培養上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
2、血清細胞裂解液
1)吸去培養板內的培養基,用消化血清細胞,加適量培養基將細胞從培養板上吹下來(lái)。懸浮細胞可省略。
2)收集血清細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養基,用預冷的PBS潤洗3次。
3)加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個(gè)孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達到裂解的目的。
3、血清
血清血清是zui常用于ELISA試劑盒檢測的一類(lèi)樣本,處理也比較簡(jiǎn)單。
用無(wú)熱原、無(wú)內du 素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
采血過(guò)程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時(shí)會(huì )釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標記的ELISA試劑盒檢測中會(huì )有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時(shí)也應避免xi 菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽(yáng)性。
4、血漿
用含血清的或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
常用的抗凝劑為EDTA、和等,檢測時(shí)還應仔細閱讀試劑盒說(shuō)明書(shū),檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。