ELISA 實(shí)驗可根據獲得的數據類(lèi)型被分為以下幾類(lèi):
定性 ELISA 只用于確定樣品中是否有抗原存在。檢測需要一個(gè)不包含抗原或包含無(wú)關(guān)對照抗原的空白對照孔。
半定量 ELISA 用于對樣品間的抗原水平進(jìn)行相對比較。
定量 ELISA 用于計算樣品中的抗原含量。實(shí)驗中需要比較由樣品測定得到的數值和由已知濃度純化的抗原梯度稀釋液得到的標準曲線(xiàn)。這是*常用的 ELISA 數據。
ELISA 標準曲線(xiàn)
標準或校正曲線(xiàn)是定量 ELISA 實(shí)驗的要素,它們可用于計算樣品中抗原的濃度。
標準曲線(xiàn)是通過(guò)繪制已知的參考抗原濃度與每一濃度(通常是450 nm處的光密度)的讀數之間的關(guān)系得出的。
大部分 ELISA 酶標儀將加入用于曲線(xiàn)擬合和數據分析的軟件。通過(guò)外推標準曲線(xiàn)的線(xiàn)性部分計算樣品中抗原的濃度。
曲線(xiàn)擬合軟件允許您使用不同的模型繪制您的數據。
線(xiàn)性圖的一個(gè)坐標軸表示抗原的濃度,另一個(gè)表示讀數。R2 值在此通常用于確定擬合,數值大于 0.99 表示擬合非常好。然而,線(xiàn)性圖往往會(huì )壓縮曲線(xiàn)下端上的數據點(diǎn),導致計算結果不準。
半對數圖可以幫助抵消線(xiàn)性圖引起的下端壓縮。半對數圖使用濃度的對數與讀數的關(guān)系。這種方法通常會(huì )得到數據點(diǎn)分布更均勻的 s 形曲線(xiàn)。
對數/對數圖可以為低到中濃度范圍提供良好的線(xiàn)性。但范圍的優(yōu)異則容易失去線(xiàn)性。
4 或 5 參數邏輯(4PL 或 5PL)曲線(xiàn)是更為復雜的方法,考慮了其他參數比如*大值和*小值,因此需要更復雜的計算。4PL 假設拐點(diǎn)周?chē)鷮ΨQ(chēng),而 5PL 考慮了不對稱(chēng)的情況,通常更適合免yi分析。
如果您的軟件允許,則 4-PL 和 5-PL 將適用于大部分 ELISA 校正標準曲線(xiàn)。如果您的軟件不允許,則*好的選擇是使用半對數或對數/對數圖。