質(zhì)粒抽提步驟:
Ⅰ.使用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒時(shí)請參考具體試劑盒的操作說(shuō)明。如Omega公司的E.Z.N.A.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin (質(zhì)粒提取盒)。
Ⅱ.堿裂解手提法:此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下:
1:接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養基。
2:37℃振蕩培養過(guò)夜。
3:取1.5ml菌體于Ep管(離心管)，以4000rpm離心3min，棄上清液。
4:加0.lml溶液I(1%葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。
5:加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH，1%SDS)，輕輕翻轉混勻，置于冰浴5min.
6:加入0.15m1預冷溶液III(5mol/LKAc，pH4.8)，輕輕翻轉混勻，置于冰浴5min.
7:以10，000rpm離心20min，取上清液于另一新Ep管
8:加入等體積的異丙醇，混勻后靜置10min.
9:以10，000rpm離心20min，棄上清。
10:用70%乙醇0.5ml洗滌一次，抽干所有液體。
11:待沉淀干燥后，溶于50ulTE緩沖液中(或60℃溫育去離子水).