一、實(shí)驗原理
MTT 分析法以活細胞代謝物還原劑 3-（4，5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT 噻唑藍為基礎。MTT 為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細胞線(xiàn)粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細胞色素 C 的作用下 tetrazolium 環(huán)開(kāi)裂，**藍色的 formazan 結晶，formazan 結晶的**量?jì)H與活細胞數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將 MTT 還原）。還原**的 formazan 結晶可在含 50% 的 N，N-二甲基甲酰胺和 20% 的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的 MTT 溶解液中溶解，利用酶標儀測定 490 nm 處的光密度 OD 值，以反映出活細胞數目。也可以用 DMSO 來(lái)溶解。
二、實(shí)驗材料
1.細胞樣品
2.試劑、試劑盒：10% 胎小牛血清 MTT 溶液 DMSO
3.儀器、耗材：96 孔板 離心機 酶聯(lián)監測儀
三、實(shí)驗步驟
1.接種細胞
用含 10% 胎小牛血清得培養液配成單個(gè)細胞懸液，以每孔 1000－10000 個(gè)細胞接種到 96 孔板，每孔體積 200ul。
2.培養細胞
同一般培養條件，培養 3－5 天（可根據試驗目的和要求決定培養時(shí)間）。
3.呈色
培養 3－5 天后，每孔加 MTT 溶液（5 mg/ml 用 PBS 配）20ul. 繼續孵育 4 小時(shí)，終止培養，小心吸棄孔內培養上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加 150ul DMSO，振蕩 10 分鐘，使結晶物充分融解。
4.比色
選擇 490nm 波長(cháng)，在酶聯(lián)監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時(shí)間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長(cháng)曲線(xiàn)。