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細胞培養的基本步驟

細胞培養的基本步驟：
1、原代培養：從供體內取出組織，經(jīng)機械或消化分離成單個(gè)細胞或單一型細胞群，在無(wú)菌、適當溫度和營(yíng)養條件下，生存、生長(cháng)和繁殖。簡(jiǎn)單步驟為：剪切組織-消化分離-擴增培養。
2、傳代培養：當細胞密度達到80%~90%時(shí)，去掉培養基，用PBS清洗，加入胰蛋白酶消化，分離細胞，再按一定比例接種到新的培養瓶中。一般2～3d后應換一次生長(cháng)液。
3、體內細胞培養：將瘤細胞懸液接種到動(dòng)物體內，形成腫瘤，再從腫瘤中分離細胞，進(jìn)行培養。
4、細胞凍存：將細胞懸液與凍存液按一定比例混合，裝入凍存管，放入-80℃冰箱，若需長(cháng)期保存需要再轉移到液氮中。
5、細胞復蘇：將凍存細胞從液氮中取出，迅速在37℃水浴中解凍，加入預熱的含血清的培養基，離心，棄上清液，加入新的培養基，放入孵箱中，培養。凍存與細胞復蘇需要遵循慢凍速溶的原則。
需要注意，懸浮細胞和貼壁細胞的傳代培養是不一樣的。

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