依據細胞株數據單指定之基礎培養基種類(lèi)、血清種類(lèi)和其它指定之成份和比例，制備培養基。絕大多數之細胞均無(wú)法立即適應不同之基礎培養基或不同之血清種類(lèi)，若因實(shí)驗需要，必須有所不同時(shí)，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養基組成，確定細胞適應后，方進(jìn)行所需之實(shí)驗。
1、 FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對細胞而言差異極大，請務(wù)必依據細胞株資料單zhi定之血清種類(lèi)培養之。
2、將培養基置于37 °C 水槽中回溫， 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之， 移入無(wú)菌操作臺內。取出冷凍管， 立即放入37 °C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過(guò)冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無(wú)菌操作臺。
3、依據細胞種類(lèi)和濃度，于無(wú)菌操作臺內取10 ml 培養基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養基，混合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養箱培養。
4、對絕大多數細胞而言，1 % 以下之冷凍保護劑DMSO，不會(huì )對細胞之貼附或活化有不 良影響，不需立刻由解凍細胞中去除，待第2天確定細胞生長(cháng)或貼附良好后再去除即可。惟對極少數因對DMSO 敏感或會(huì )造成細胞分化之細胞，需立即去除DMSO 者，則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養基中，離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養基，將細胞均勻混合后，轉移至培養瓶中，再放入37 °C， 5 % CO2 培養箱培養。