所謂的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 就是通過(guò)對 PCR 擴增反應中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時(shí)檢測從而實(shí)現對起始模板定量及定性的分析。在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應中，引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì)，隨著(zhù) PCR 反應的進(jìn)行，PCR 反應產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強度信號，這樣我們就可以通過(guò)熒光強度變化監測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線(xiàn)。
1、如果有標準曲線(xiàn)，按照標準曲線(xiàn)計算。
2、一般都是相對量，則用delta delta CT方法來(lái)計算。
3、舉例如下：對照組基因A的CT值為20， 內參（比如βactin)CT值15。實(shí)驗組基因A CT值18，內參CT值14。
4、首先算加樣量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說(shuō)實(shí)驗組的加樣量是對照組的2倍?；駻: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是說(shuō)基因A的量在實(shí)驗組是對照組的4倍。但是由于加樣量是2倍，所以4處以2=2，后的相對量是2倍。
5、幾點(diǎn)注意：必須確定擴增的特異性，只有相同目標的CT值才能相減（擴增效率有可能不同），2的某次方只是理論值，實(shí)際擴增效率低于2，不用Syber Green。