復蘇細胞收集處理:
1、請按照說(shuō)明書(shū)提前準備好基礎培養基、血清、因子、胰酶、雙抗,不要隨意更改培養條件,提前將生物安 全柜進(jìn)行酒精消 毒和紫滅 菌。
2、 收到細胞后,若發(fā)現培養瓶破損、漏液、培養基渾濁或污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
3、 細胞在37℃培養箱中靜置2-3小時(shí),在倒置顯微鏡下確認細胞狀態(tài),給細胞(100倍×2張,200倍×2張)以及培養瓶(外觀(guān)×1張)拍照留存,售后時(shí)肯定需要提供。
4、 瓶?jì)瘸湟号囵B基(運輸培養基)不能再用來(lái)培養細胞,需按照說(shuō)明書(shū)上的培養條件配制新鮮完全培養基培養細胞。
5、鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,收集全部充液培養基,250g離心5分鐘,棄去培養瓶中充液培養基,用新鮮配制的完全培養基重懸未貼壁的細胞,將細胞鋪瓶至新的T25細胞培養瓶,補齊完全培養基至6mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,立刻對細胞進(jìn)行傳代處理。
注:在快遞運送過(guò)程中細胞因振動(dòng)會(huì )造成脫落現象,不論繼續培養還是傳代,未貼壁的細胞均需離心回收。
6、收到細胞后第1次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 ,保種1支,另外1支傳代至T25新瓶,前3代建議均采用1:2傳代,若細胞明顯達到對數期,1:2傳代后第2天就長(cháng)滿(mǎn),則可提高傳代比例,采用1:3傳代,前面代次建議代代保種,以妨出現問(wèn)題后無(wú)種可用。
7、 由于細胞在運輸過(guò)程中失去原有適宜的生長(cháng)條件且長(cháng)時(shí)間顛簸,收到細胞進(jìn)行傳代后,建議前3-5代培養條件可適當提高血清含量以促進(jìn)恢復細胞原有狀態(tài)并縮短到達對數期的時(shí)間。
8、 市面上血清魚(yú)龍混雜,假血清(BSA或替代物冒充血清)、劣質(zhì)血清(小牛冒充胎牛)、水貨(國產(chǎn)冒充進(jìn)口)屢見(jiàn)不鮮,若客戶(hù)培養細胞過(guò)程中明顯感覺(jué)細胞生長(cháng)速度不及預期,且無(wú)法更換血清,建議酌情提高血清含量來(lái)彌補 血清質(zhì)量的缺陷,以期提高細胞生長(cháng)速度。
9、實(shí)驗結束后,將臺子內的細胞放回培養箱,試劑放回冰箱,后噴灑Deeming實(shí)驗室安 全衛士,預防微生物污染,關(guān)閉生物安 全柜,打開(kāi)紫外滅 菌30分鐘以上。