影響細胞轉染實(shí)驗轉染因素 :
1、血清
血清影響復合物的形成,降低轉染效率
陽(yáng)離子脂質(zhì)體和 DNA 的*佳量在使用血清時(shí)會(huì )有所不同,因此想在轉染培養基中加入血清時(shí)要進(jìn)行條件優(yōu)化。大部分細胞可以在無(wú)血清培養基中幾個(gè)小時(shí)內保持健康,對于對血清缺乏比較敏感的細胞,可以使用 OPTI-MEM I 培養基。對于對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞,建議使用 LIPOFECTAMINE 2000。
2、抗生su
比如青霉素和鏈霉素,是影響轉染的培養基添加物。這些抗生su一般對于真核細胞無(wú)毒,但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性,使抗生su可以進(jìn)入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率低。
3、細胞代數
轉染前細胞*好經(jīng)過(guò) 1-2 次傳代保證細胞生長(cháng)旺盛容易轉染,注意貼壁細胞一旦長(cháng)滿(mǎn)就不好轉染。
4、細胞鋪板密度
一般轉染時(shí),貼壁細胞密度為 70%-90%,懸浮細胞密度為 2*10^6--4*10^6 細胞/ml 時(shí)效果較好。確保轉染時(shí)細胞沒(méi)有長(cháng)滿(mǎn)或處于靜止期。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產(chǎn)量。
5、DNA 質(zhì)量
DNA 質(zhì)量對轉染效率影響非常大。一般的轉染技術(shù)基于電荷吸引原理,如果 DNA 不純,如帶少量的鹽離子,蛋白,代謝物污染都會(huì )顯著(zhù)影響轉染復合物的有效形成和轉染的進(jìn)行。