操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長(cháng)期的細胞(貼壁細胞消化下來(lái)離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時(shí)間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長(cháng)期保存

方法二:使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無(wú)需自己配制,無(wú)需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
產(chǎn)品名稱(chēng)
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AAV-293腺病毒轉化的人胚腎細胞
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英文名稱(chēng)
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:人胃癌細胞
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分類(lèi)
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人細胞系
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貨號
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XG-X7557
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組織來(lái)源
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胎兒腎臟
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形態(tài)
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上皮樣
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種屬來(lái)源:人
性別年齡:女性,胎兒
組織來(lái)源:胎兒腎臟
生長(cháng)特性:貼壁生長(cháng)
細胞形態(tài):上皮樣
細胞規格:1 X 106cells/T25或1 mL凍存管
培養條件:DMEM + 10% fetal bovine serum
(FBS)+1%P/S 37 ℃, 5% CO2
凍存條件:90% FBS + 10% DMSO
傳代方法:1:2-1:6傳代, 2-3天傳1代
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
白介素17F抗體
IL-17F
1號染色體開(kāi)放閱讀框148抗體
C1orf148
魚(yú)熱休克蛋白70(HSP-70)elisa檢測試劑盒
大鼠水通道蛋白4(AQP-4)elisa檢測試劑盒
10倍酵母菌SD-URA培養基
Hoechst33342/PI雙染試劑盒100T
腫瘤錯配修復基因PMS1抗體
PMS1
熱休克蛋白β4抗體
HSPB4/Alpha A
Crystallin
軟骨基質(zhì)相關(guān)蛋白UCMA抗體 Anti-UCMA
T細胞凋亡相關(guān)蛋白TDAG51抗體 Anti-PHLDA1/TDAG51
細胞中心粒蛋白抗體 Anti-POC5
癲癇樣相關(guān)蛋白6抗體 Anti-SEZ6L
APC標記的羊抗大鼠IgG H&L
Goat Anti-Rat IgG
H&L / APC
Focadhesin蛋白抗體
Focadhesin
犬白介素15(IL15)elisa分析檢測試劑盒
AAV-293腺病毒轉化的人胚腎細胞IL15 ELISA
kit
小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)elisa分析檢測試劑盒
MYO/MBELISAKit
猴載脂蛋白B100(Apo-B100)elisa分析檢測試劑盒
Apo-B100 ELISA Kit
人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)elisa分析檢測試劑盒
HumanSP-AELISAKit
胰脂肪酶抗體
Pancreatic Lipase
鈣平衡調節蛋白1抗體
CALHM1