操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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MDBK[NBL-1]（牛腎細胞）
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英文名稱(chēng)
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MDBKNBL
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分類(lèi)
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牛細胞系
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貨號
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XG-X9226
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組織來(lái)源
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腎；正常細胞
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形態(tài)
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上皮細胞樣
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細胞別稱(chēng)；MDBK (NBL-1); NBL-1;
Madin-Darby Bovine Kidney; Madin Darby Bovine Kidney
種屬來(lái)源；牛
年齡性別；雄；成年
組織來(lái)源；腎；正常細胞
生長(cháng)特性；貼壁生長(cháng)
細胞形態(tài)；上皮細胞樣
細胞代數；10代以?xún)?span>
背景簡(jiǎn)介；MDBK(NBL-1)細胞是由S·H·Madin和N·B·Darby在1957年2月18日從一只表觀(guān)正常的成年牛腎臟建立的。1973年，這株MDBK(NBL-1)細胞被牛病毒性痢毒(BVDV)感染；1982年，發(fā)現了一株未被BVDV感染的MDBK(NBL-1)細胞株，此細胞初來(lái)自ATCC1967年7月第96代的凍存管。MDBK(NBL-1)細胞的后代經(jīng)NVSL檢測，未發(fā)現被任何病毒污染的證據。1982年8月，R·A·Van Deusen將MDBK(NBL-1)提供給ATCC時(shí)，已傳代至第110代；MDBK(NBL-1)細胞未被BVDV感染。
生物等級；2
細胞規格；1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測；無(wú)
基因表達情況；keratin
保藏機構；ATCC; CCL-22 ATCC;
CRL-6071DSMZ; ACC-174 ECACC; 90050801
培養基；RPMI-1640+10% FBS+PS
培養條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲存
；90%FBS+10%DMSO
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠磷酸化細胞外信號調節激酶(pERK)elisa生化檢測試劑盒
紅細胞膜蛋白4.2抗體
protein 4.2
CD84抗體
A型H1N1流感病毒神經(jīng)氨酸酶抗體
Influenza A H1N1
Neuraminidase
錨蛋白重復結構域蛋白20A3抗體
ANKRD20A3
非同位素HRP化學(xué)發(fā)光法DNA南方雜交印跡完全試劑盒
人16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)elisa生化檢測試劑盒
大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)氨基端肽(NTXⅠ)elisa檢測試劑盒
CD84
神經(jīng)突起誘導因子受體UNC5B抗體 Anti-UNC5B/UNC5H2
血小板衍化生長(cháng)因子β抗體 Anti-PAFAH1B2
蛋白質(zhì)精氨酸亞型2抗體 Anti-PADI2/PAD2
脂肪酸轉運蛋白5抗體 Anti-SLC27A5
辣根過(guò)氧化物酶標記的羊抗大鼠IgG H&L
MDBK[NBL-1]（牛腎細胞）Goat Anti-Rat
IgG H&L / HRP
鋅結合乙醇脫氫酶結構域蛋白2抗體
ZADH2
犬CD6分子(CD6)elisa生化檢測試劑盒
CD6 ELISA Kit
小鼠含球蛋白樣環(huán)和上皮生長(cháng)因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)elisa生化檢測試劑盒
Tie-2ELISAkit
猴促腎上皮質(zhì)釋放(CRH)elisa生化檢測試劑盒
CRH ELISA kit
人二磷酸腺苷(ADP)elisa生化檢測試劑盒
ADPELISAkit
小鼠腫瘤壞死因子β(TNFβ)elisa檢測試劑盒
大鼠肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)elisa生化檢測試劑盒
組織ROCK-I激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人肌質(zhì)/內質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶(ATP2A1)elisa生化檢測試劑盒