操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長(cháng)期的細胞(貼壁細胞消化下來(lái)離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時(shí)間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長(cháng)期保存

方法二:使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無(wú)需自己配制,無(wú)需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
產(chǎn)品名稱(chēng)
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UMR-106大鼠骨肉瘤細胞
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英文名稱(chēng)
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UMR-106:UMR106
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分類(lèi)
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大鼠細胞系
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貨號
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XG-X3732
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組織來(lái)源
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器官:骨骼; 品系:Sprague-Dawley; :骨肉瘤
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形態(tài)
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上皮細胞樣
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生長(cháng)特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
生長(cháng)培養基 DMEM+10%
FBS+1% P/S
凍存條件
凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 UMR-106細胞是注射放射性同位su磷(32P)誘導產(chǎn)生的可移植性大鼠骨肉瘤克隆建立的細胞系。UMR-106細胞對PTH、前列腺su及破骨甾體有響應。UMR-106細胞對PTH的響應度比相關(guān)細胞株UMR-108要高;蛋白激酶C的活化抑制ATP誘導的胞內鈣水平的升高。起始骨肉瘤和克隆株UMR-106細胞都是T.J.Martin建立的。
組織來(lái)源 器官:骨骼; 品系:Sprague-Dawley;
:骨肉瘤
細胞類(lèi)型 腫瘤細胞
腫瘤類(lèi)型 肉瘤細胞
生物等級 1
保藏機構 ATCC; CRL-1661 ECACC; 90111314
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠活性氧(ROS)elisa分析檢測試劑盒
甲基化樣蛋白2B抗體
METTL2B
細胞質(zhì)分裂付出蛋白4抗體
DOCK4
人CD3分子(CD3)elisa分析檢測試劑盒
組織基質(zhì)金屬(MMP-9)捕獲檢測試劑盒
小鼠凝血因子Ⅸ(FⅨ)elisa檢測試劑盒
大鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)elisa檢測試劑盒
磷酸化鈣調磷酸酶B亞基B1抗體
Phospho-Calcineurin
B (Tyr106)
羥基類(lèi)固醇脫氫酶樣蛋白2抗體
HSDL2
踝蛋白抗體 Anti-Talin
前列腺特異性G蛋白偶聯(lián)受體/嗅覺(jué)受體51E2抗體 Anti-PSGR/OR52A2
非典型蛋白激酶C特定相互作用蛋白抗體 Anti-PAR3
絲氨酸/蘇氨酸激酶36融合源蛋白抗體 Anti-STK36
UMR-106大鼠骨肉瘤細胞羅丹明標記的兔抗長(cháng)爪沙鼠IgG H&L
Rabbit Anti-MG IgG
H&L / RBITC
磷酸化磷酸神經(jīng)膜抗體
phospho-FXYD1
(Ser83)
著(zhù)絲粒ZWILCH蛋白抗體 Anti-ZWILCH
NADPH氧化酶NOX家族的成員4抗體 Anti-NOX4/NADPH oxidase 4
衰老標記蛋白30抗體 Anti-Regucalcin/SMP30
轉錄因子SOX17抗體 Anti-SOX17
大鼠Ⅰ型前膠原(PCⅠ)elisa分析檢測試劑盒
PC I ELISA Kit
人富組氨酸糖蛋白(HRG)elisa分析檢測試劑盒
白細胞介素36γ抗體
IL36 gamma
紅細胞腺苷脫氨酶3抗體
AMPD3