操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長(cháng)期的細胞(貼壁細胞消化下來(lái)離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時(shí)間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長(cháng)期保存

方法二:使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無(wú)需自己配制,無(wú)需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
產(chǎn)品名稱(chēng)
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Sp2/0小鼠骨髓瘤細胞
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英文名稱(chēng)
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Sp2/0:Sp20
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分類(lèi)
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小鼠細胞系
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貨號
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XG-X3690
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組織來(lái)源
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脾臟
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形態(tài)
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母細胞樣
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生長(cháng)特性 懸浮細胞
細胞形態(tài) 母細胞樣
生長(cháng)培養基 DMEM+10%
FBS+1% P/S
凍存條件
凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
推薦傳代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項 該細胞為懸浮細胞,請注意離心收集細胞懸液;請勿直接倒掉細胞培養液。
背景描述 Sp2/0-Ag14細胞是由綿羊紅細胞的BALB/c小鼠脾細胞和P3X63Ag8骨髓瘤細胞融合得到的。Sp2/0-Ag14細胞不分泌球蛋白,對20μg/ml的8-氮niao嘌呤有抗性,對HAT比較敏感;Sp2/0-Ag14細胞可以作為細胞融合時(shí)的B細胞組分用于制備雜交瘤;鼠痘病毒陰性。
組織來(lái)源 脾臟
細胞類(lèi)型 腫瘤細胞
腫瘤類(lèi)型 骨髓瘤細胞
生物等級 1
抗原表達情況 H-2d
保藏機構 ATCC; CRL-1581 ATCC;CRL-8287
DSMZ;ACC-146 ECACC;85072401
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠白介素6(IL6)elisa檢測試劑盒
三聚氰胺抗體
Melamine
1號染色體開(kāi)放閱讀框124抗體
C1orf124
DNA連接試劑專(zhuān)題
小鼠骨鈣素(OT)elisa檢測試劑盒
HPLC試劑盒
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)活性終點(diǎn)比色法定量檢測試劑盒
磷酸變位酶1抗體
PGAM1
卷曲螺旋結構域蛋白18抗體
CCDC18
非受體酪氨酸蛋白激酶2抗體 Anti-Tyk2
PSD95相關(guān)緊密連接蛋白PATJ抗體 Anti-PATJ
蛋白C抑制因子抗體 Anti-Protein C inhibitor/SerpinA5
細胞信號轉導分子SMAD5抗體 Anti-SMAD5
Sp2/0小鼠骨髓瘤細胞Cy5.5標記的兔抗豚鼠IgM
Rabbit Anti-Guinea
Pig IgM / Cy5.5
EIF2D蛋白抗體
EIF2D
鋅指蛋白426抗體 Anti-ZNF426
1型神經(jīng)纖維瘤抗體 Anti-NF1/Neurofibromin 1
磷酸化核轉錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 Anti-Phospho-RelB(Ser573)
剪接體相關(guān)蛋白155抗體 Anti-SAP155/SF3B1
大鼠3-O-甲基多巴(3-OMD)elisa分析檢測試劑盒
3-OMD ELISA kit
人鈣結合蛋白(CR)elisa分析檢測試劑盒
甘露聚糖結合凝集素抗體
Mannan Binding
Lectin
DENND2A蛋白抗體
DENND2A