操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
|
產(chǎn)品名稱(chēng)
|
RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞
|
英文名稱(chēng)
|
RAW 264.7:RAW 2647
|
|
分類(lèi)
|
小鼠細胞系
|
貨號
|
XG-X3683
|
|
組織來(lái)源
|
Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞
|
形態(tài)
|
不規則形
|
生長(cháng)特性 貼壁細胞，不用yi酶消化
細胞形態(tài) 不規則形
生長(cháng)培養基 DMEM＋10%
FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:6~1:8
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項 1、該細胞不建議使用yi酶消化，yi酶會(huì )刺激分化； 2、
超過(guò)3天不傳代細胞容易分化； 3、 培養時(shí)，存在少量分化細胞，屬于正?，F象。
背景描述 RAW 264.7細胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。RAW
264.7細胞不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗陰性。RAW
264.7細胞可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且可以抗體依賴(lài)性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導RAW 264.7細胞分解紅血球，但對腫瘤靶細胞無(wú)作用。
年齡（性別） 雄性，成年
組織來(lái)源 Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞
細胞類(lèi)型 腫瘤細胞
腫瘤類(lèi)型 白血病細胞
生物等級 2
倍增時(shí)間 ~12-30小時(shí)
受體表達情況 complement (C3)
抗原表達情況 H-2d
基因表達情況 lysozyme, H-2d; Tested and
found negative for ectromelia virus (mousepox).
保藏機構 ATCC; TIB-71 ECACC; 91062702
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠生長(cháng)分化因子11(GDF11)elisa檢測試劑盒
DNA結合蛋白C抗體
MSY2
下頜發(fā)育綜合征相關(guān)蛋白FAKD3抗體
倉鼠白介素2(IL-2)elisa生化檢測試劑盒
IL-2 ELISA Kit
人電子轉移黃素蛋白β肽(ETFB)elisa生化檢測試劑盒
HumanETFBELISAKit
組織環(huán)氧化酶（CYCLOOXYGENASE-1/2）總活性熒光定量檢測試劑盒
人P選擇素（P-Selectin）elisa檢測試劑盒
大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa生化檢測試劑盒
FAKD3
跨膜蛋白161A抗體 Anti-TMEM161A
周期素D相關(guān)蛋白抗體 Anti-RUNX1T1/ETO
核有絲分裂器NuMA蛋白抗體 Anti-NuMA
細胞骨架相關(guān)蛋白抗體 Anti-SM22 Alpha
Cy5標記的兔抗雞IgM
RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞Rabbit
Anti-Chicken IgM / Cy5
內質(zhì)網(wǎng)氨基肽酶2抗體
ERAP2
人β1,4-N-乙酰氨基半乳糖轉移酶2(B4GALNT2)elisa生化檢測試劑盒
HumanB4GALNT2ELISAKit
豬白介素1(IL-1)elisa生化檢測試劑盒
IL-1ELISAKit
大鼠縫隙連接蛋白α1,43kDa(GJA1)elisa生化檢測試劑盒
43kDa(GJA1)ELISA kit
豚鼠白介素17(IL-17)elisa生化檢測試劑盒
IL-17ELISAKit
豬α干擾素(IFN-α)elisa生化檢測試劑盒
大鼠激肽釋放酶6(KLK6)elisa檢測試劑盒
細胞TEL激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人抗中性粒細胞胞漿抗體（cANCA）elisa檢測試劑盒