細胞特性
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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E14小鼠胚胎干細胞
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英文名稱(chēng)
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E14:E14
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分類(lèi)
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小鼠細胞系
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貨號
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XG-X3629
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組織來(lái)源
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見(jiàn)說(shuō)明
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形態(tài)
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細胞數量：1*10^6
細胞運輸：干冰運輸（2ml凍存管）或活細胞運輸（T25瓶）
培養基： 準備DMEM 基礎培養基 81%培養基；胎牛血清，15%；GlutaMAX-1谷an酰胺，1 %；MEM NEAA非必需氨基酸，1%；Sodium Pyruvate丙酮酸鈉，1%；P/S青霉su-鏈霉su，1%；β-巰基乙醇，0.5 mL（1000X)；LIF ，5μg（10ng/mL）。使用昆明白MEF作為飼養層細胞。
培養條件：培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。細胞凍存：液氮凍存（培養液 60%%，FBS 30%%，DMSO
10%，現用現配）
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
磷酸化肌細胞增強因子2C抗體 phospho-MEF2C (Ser396)
磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤樣蛋白p107抗體 phospho-p107 (Ser975)
CSMD1抗體 CSMD1
DNAJC2蛋白抗體 DNAJC2
小鼠抗人CD71單克隆抗體 human CD71
鋅指蛋白265抗體 ZRANB2/ZNF265
半胱胺酸蛋白酶蛋白5抗體 Caspase-5 p20
丙酮酸脫氫酶激酶1抗體 PDK1/Mitochondrial Pyruvate dehydrogenase kinase 1
神經(jīng)突起生長(cháng)誘導因子受體UNC5D抗體 UNC5D
生物素標記的腺病毒早期E1A蛋白抗體 Adenovirus 5 E1A, Biotin conjugated
NHP2核糖核蛋白樣蛋白1抗體 NHP2L1
p19ARF抑癌基因抗體 CDKN2A/p19ARF
轉錄因子DP3/肝癌相關(guān)抗原661抗體 TFDP3
椎骨蛋白2抗體 FEZ2
含普列克底物蛋白家族G成員2抗體 PLEKHG2
候選腫瘤抑制基因MARVELD1抗體 MARVELD1
大鼠Ⅱ型膠原α1(COL2α1)elisa檢測試劑盒
E14小鼠胚胎干細胞小鼠兒茶酚抑素elisa檢測試劑盒
雞17羥皮質(zhì)類(lèi)固醇(17-OHCS)elisa分析檢測試劑盒
腺苷脫氨酶（ADA）定量檢測試劑盒
小鼠抑制素結合蛋白(INHBP)elisa檢測試劑盒
大鼠密封蛋白(OCLN)elisa檢測試劑盒
DA高效液相色譜電化學(xué)定量檢測試劑盒
土壤亮氨酸氨基肽酶（S- LAP） 測試盒
人睫狀神經(jīng)營(yíng)養因子(CNTF)elisa分析檢測試劑盒
細胞組織K（CATHEPSIN
K）活性熒光定量檢測試劑盒
小鼠流行性乙型腦炎(JE)抗體(IgG)elisa檢測試劑盒免費代測
大鼠肝X受體α(LXRα)elisa檢測試劑盒免費代測
白介素31受體a抗體
IL31RA
1號染色體開(kāi)放閱讀框195抗體
C1orf195
操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。