細胞特性
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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HCMEC/D3永生化人腦微血管內皮細胞
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英文名稱(chēng)
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HCMEC/D3:HCMECD3
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分類(lèi)
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人細胞系
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貨號
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XG-X3317
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組織來(lái)源
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腦微血管
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形態(tài)
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紡錘形細胞
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生長(cháng)特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 紡錘形細胞
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養基+40% FBS+5% DMSO
溫度：液氮
培養方案A（默認）
生長(cháng)培養基:
hCMEC/D3 細胞培養基（CM-0843）
培養條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:6
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來(lái)源文獻)
背景描述 The hCMEC/D3 cell line was
derived from human temporal lobe microvessels isolated from tissue excised
during surgery for control of epilepsy. The primary isolate was enriched in
cerebral endothelial cells (CECs). In the first passage, cells were
sequentially immortalized by lentiviral vector transduction with the catalytic
subunit of human telomerase (hTERT) and SV40 large T antigen, following which
CEC were selectively isolated by limited dilution cloning, and clones were
extensively characterized for brain endothelial phenotype. This brain
microvascular endothelial cell line represents one such model of the human BBB
that can be easily grown and is amenable to cellular and molecular studies on
pathological and drug transport mechanisms with relevance to the central
nervous system (CNS).
年齡（性別） 女性；
組織來(lái)源 腦微血管
細胞類(lèi)型 轉化細胞系
生物等級 BSL-2
保藏機構 KCB; KCB 2019022YJ
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
甲基樣蛋白15抗體
METTL15/METT5D1
1號染色體開(kāi)放閱讀框162抗體
C1orf162
跨膜蛋白16C抗體 Anti-TMEM16C/Anoctamin 3
反義導向分子RGMB抗體 Anti-RGMB/Repulsive Guidance
Molecule B
谷氨酸受體2D抗體 Anti-NR2D/NMDAR2D
血管內皮生長(cháng)因子抗體 Anti-VEGF
原肌球蛋白4抗體
TPM4
凋亡相關(guān)蛋白激酶樣蛋白1抗體
DAPL1
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Sgk3抗體 Anti-SGK3
水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體 Anti-Os05g0477200 protein
視網(wǎng)膜母細胞瘤樣蛋白p107抗體 Anti-p107
細胞生長(cháng)抑制基因1蛋白抗體 Anti-TPP1/CLN2
PE-Cy5標記小鼠IgG（型對照)
HCMEC/D3永生化人腦微血管內皮細胞Mouse IgG /
PE-Cy5
HECTD4蛋白抗體
HECTD4
大鼠核因子κB(NF-κB)elisa分析檢測試劑盒
NF-κB ELISA Kit
兔干擾素誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)elisa分析檢測試劑盒
CXCL10ELISAkit
黑色素瘤分化相關(guān)蛋白5抗體
IFIH1
遺傳性失明相關(guān)蛋白AIPL1抗體
AIPL1
植物花生四烯酸(AA)elisa分析檢測試劑盒
AA ELISA kit
人促甲狀腺素受體(TSHR)抗體elisa分析檢測試劑盒
HumanTSHRantibodyELISA
操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。