操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長(cháng)期的細胞(貼壁細胞消化下來(lái)離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時(shí)間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長(cháng)期保存

方法二:使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無(wú)需自己配制,無(wú)需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
細胞別稱(chēng);C918;人眼脈絡(luò )黑色素瘤細胞
種屬來(lái)源;人
組織來(lái)源;眼
生長(cháng)特性;貼壁生長(cháng)
細胞形態(tài);多角形細胞樣
背景簡(jiǎn)介;STR檢測發(fā)現,三株人侵襲性脈絡(luò )膜黑色素瘤細胞C918、M619和Mum-2B為同一遺傳背景,懷疑存在交叉污染。
細胞規格;1x106cells/T25或1mL凍存管
支原體檢測;無(wú)
培養基;RPMI-1640+10% FBS+PS
培養條件;氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件;無(wú)血清凍存液,液氮儲存
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠5'-核苷酸酶,胞膜(NT5E/CD73)elisa分析檢測試劑盒
麥芽糖待測樣品處理試劑盒
溶酶體染色試劑盒(綠色熒光) BBcellProbe L01250T
大鼠髓鞘堿性蛋白抗體(MBP antibody)elisa檢測試劑盒
組織纖維蛋白溶酶原激活劑抑制物(PAI)活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒
蛋白表位標記技術(shù)試劑盒
小鼠草胺膦乙酰轉移酶(PAT)elisa檢測試劑盒
鴿子胃動(dòng)素(MTL)elisa分析檢測試劑盒
比色法定量檢測試劑盒
羧酸酯酶2抗體 CES2
調節因子X相關(guān)錨蛋白RFXANK抗體 RFXANK
P-鈣粘附分子抗體 P-cadherin
Ras相關(guān)雌調節生長(cháng)抑制蛋白抗體 RERG
21號染色體開(kāi)放閱讀框70抗體 C21orf70
5號染色體開(kāi)放閱讀框35抗體 C5orf35
肌微管素相關(guān)蛋白6抗體 MTMR6
脊髓小腦共濟失調蛋白7抗體 Ataxin 7
人眼脈絡(luò )黑色瘤細胞; c918 (STR)血小板反應蛋白2/凝血酶敏感蛋白2抗體 Thrombospondin 2
液泡蛋白分選蛋白39抗體 VPS39
低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白10抗體 LRP10
短鏈L-3羥烷基輔酶A脫氫酶抗體 HADHSC
FITC標記人CD29單克隆抗體 human CD29/FITC
FLJ44817蛋白抗體 FLJ44817
硫辛酸合成酶抗體 LIAS
鈉離子通道蛋白7α/Na+
CP type VIIα抗體 SCN7A
植酸酶(phytase)試劑盒
大鼠激肽原1(KNG1)elisa檢測試劑盒
細胞TRKB激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
倉鼠組織蛋白酶K(cath-K)elisa生化檢測試劑盒
cath-K ELISA Kit
人多巴胺(DA)elisa生化檢測試劑盒
DAELISAKIT