細胞特性
細胞別稱(chēng)；MSC-EGFP-LUC；人臍帶間充質(zhì)干細胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標記；人臍帶間充質(zhì)干細胞-EGFP-LUC
種屬來(lái)源；人
組織來(lái)源；臍帶
生長(cháng)特性；貼壁生長(cháng)
形態(tài)特征；梭形細胞樣
質(zhì)量檢測；人臍帶間充質(zhì)干細胞純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等
產(chǎn)品規格；1x106cells/T25細胞培養瓶
培養基；MSC-EGFP-LUC人臍帶間充質(zhì)干細胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標記培養基（IML-099-1）
培養條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
背景簡(jiǎn)介；臍帶間充質(zhì)干細胞是一種能分化成骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞的多能干細胞。其具有強大的殖能力，且參與構成造血微環(huán)境，因此被廣泛應用于組織工程，細胞和基因。Luciferase MSC細胞穩定表達螢火蟲(chóng)熒光素酶和綠色熒光蛋白。該細胞株性狀穩定，培養時(shí)不需要添加維持?？捎米魑灮鹣x(chóng)熒光素酶活性檢測中的陽(yáng)性對照，也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗。 MSC細胞通過(guò)慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
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CD57/PerCP-Cy5.5
組蛋白H3 K9甲基轉移酶抗體 SUV39H1
11號染色體開(kāi)放閱讀框65抗體 C11orf65
褐黑素相關(guān)蛋白ART抗體 AGRP
環(huán)指蛋白142抗體 RNF142
人臍帶間充質(zhì)干細胞-EGFP-LUC;MSC-EGFP-LUC-PURO鋅指蛋白775抗體 ZNF775
信號通路Wnt3a抗體 Wnt3a
程序性死亡配體2（CD273）單克隆抗體 PDCD1LG2
單紡錘體蛋白激酶1抗體 TTK
EHD2蛋白抗體 EHD2
FAM118B蛋白抗體 FAM118B
磷酸化嗜中性粒細胞胞漿因子4抗體 Phospho-NCF4 (Thr154)
磷脂爭奪酶1抗體 Scramblase 1
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HSVⅡ-AbELISAKit
操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。