操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長(cháng)期的細胞(貼壁細胞消化下來(lái)離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時(shí)間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長(cháng)期保存

方法二:使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無(wú)需自己配制,無(wú)需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
細胞別稱(chēng);NCI-H226-LUC-PURO;人肺鱗癌細胞株-熒光素酶標記;人肺鱗癌細胞-LUC-PURO
種屬來(lái)源;人
組織來(lái)源;肺
生長(cháng)特性;貼壁生長(cháng)
細胞形態(tài);上皮細胞樣
背景簡(jiǎn)介;Luciferase NCI-H226細胞穩定表達螢火蟲(chóng)熒光素酶。該細胞株性狀穩定,培養時(shí)不需要添加維持??捎米魑灮鹣x(chóng)熒光素酶活性檢測中的陽(yáng)性對照,也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗。該細胞通過(guò)慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。NCI-H226 [H226]細胞是于1980年分離建立的。
生物等級;1
細胞規格;1x106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測;無(wú)
保藏機構;ATCC; CRL-5826
培養基;90%DMEM+10%FBS+PS+1. 0ug/ml
puro
培養條件;氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件;無(wú)血清凍存液,液氮儲存
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人白三烯B4(LTB4)elisa分析檢測試劑盒
即用型SABC-POD組化試劑盒 1盒160張片
載玻片細胞COLLAGEN I蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
小鼠白三烯C4(LTC4)elisa檢測試劑盒
大鼠5'-核苷酸酶,胞膜(NT5E/CD73)elisa檢測試劑盒
人白介素37(IL-37)elisa檢測試劑盒
脂肪氧化酶(lipoxygenase)活性比色法定量檢測試劑盒
小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)elisa檢測試劑盒
大鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)elisa檢測試劑盒
神經(jīng)Wiskott Aldrich綜合征蛋白抗體 N WASP
神經(jīng)細胞特異性鈣結合蛋白抗體 Hippocalcin
MYCBPAP抗體 MYCBPAP
NMD3蛋白抗體 NMD3
豬皰疹病毒1型 ICP4蛋白抗體 ICP4/IE180
轉錄因子LBX2抗體 LBX2
冠狀病毒抗體 SARS putative orflab
polyprotein
核干細胞因子鳥(niǎo)嘌呤核苷酸結合蛋白3抗體 Nucleostemin
人肺鱗癌細胞+LUC;NCI-H226-LUC-PURO小細胞跨膜糖化蛋白抗體 SMAGP
鋅指蛋白277抗體 ZNF277
半乳糖變旋酶抗體 Mutarotase
丙酰輔酶A羧化酶β鏈抗體 PCCB
CTDSPL2蛋白抗體 CTDSPL2
DNAJC9蛋白抗體 DNAJC9
磷酸化埃茲蛋白抗體 Phospho-Ezrin (Thr567)
磷酸化脊髓小腦失調癥蛋白1抗體 phospho-Ataxin 1 (Ser775)
H-Ras鳥(niǎo)苷酸酶活性分析試劑盒
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒50T
大鼠速激肽受體2(TACR2)elisa檢測試劑盒
孕/孕酮(PROG)elisa生化檢測試劑盒
PROG ELISA kit
人白介素增強子結合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)elisa生化檢測試劑盒
HumanILF2ELISAkit