操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長(cháng)期的細胞(貼壁細胞消化下來(lái)離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時(shí)間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長(cháng)期保存

方法二:使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無(wú)需自己配制,無(wú)需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
生長(cháng)特性 懸浮細胞
細胞形態(tài) 圓形(葡萄狀)
生長(cháng)培養基 RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
凍存條件
凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
推薦傳代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項 該細胞為懸浮細胞,請注意離心收集細胞懸液;請勿直接倒掉細胞培養液。
背景描述 WERI-Rb-1細胞是由R·M·McFall和T·W·Sery于1974年建立的兩株人眼癌細胞系中的一株。WERI-Rb-1細胞能在Difco Bacto-Agar中存活但不形成克隆。掃描電鏡顯示,在WERI-Rb-1細胞表面囊泡、板狀偽足和微絨毛在數量上和頻率上的改變。細胞分化研究,腫瘤的動(dòng)物模型和生化評價(jià)都涉及WERI-Rb-1細胞。
年齡(性別) 女;1年
組織來(lái)源 眼睛,視網(wǎng)膜
細胞類(lèi)型 腫瘤細胞
腫瘤類(lèi)型 膠質(zhì)瘤細胞
生物等級 1
保藏機構 ATCC; HTB-169 DSMZ; ACC-90
ECACC; 06070602
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)elisa分析檢測試劑盒
大鼠胰高血糖素樣肽1(GLP1)elisa檢測試劑盒
細胞樣品氧化酶表達組織化學(xué)檢測試劑盒
膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)50T
細胞可溶性總核蛋白制備試劑盒
冰凍切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒
牛1,25二羥基維生素D3(1,25
DHVD3)elisa檢測試劑盒免費代測
保幼3(JH3)含量測試盒
小鼠精氨酸加壓素受體1B(AVPR1B)elisa檢測試劑盒
趨化因子結合蛋白2抗體 CCBP2
熱休克因子結合蛋白1樣蛋白1抗體 HSBP1L1
Histone H3.3重組兔單克隆抗體 Histone H3.3
kappa型受體抗體 kappa Opioid receptor
造血干細胞抗原CD133相關(guān)蛋白抗體 Prominin 2
整合素αM/巨噬細胞表面分子抗體 CD11b
富含亮氨酸重復蛋白6抗體 LRRC6
鈣粘蛋白14抗體 FAT4
WERI-RB-1人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞細胞角蛋白75抗體 KRT75
細胞衰老抑制基因抗體 RSL1D1
T細胞調控相關(guān)蛋白抗體 CRTAM
α1,4-N-乙酰葡糖胺轉移酶α4Gn-T抗體 A4GNT
APC-Cy7標記小鼠CD62L單克隆抗體 mouse
CD62L/APC-Cy7
ATP依賴(lài)RNA解旋酶DDX42抗體 DDX42
凱爾血型糖蛋白CD238抗體 CD238
老年癡呆相關(guān)類(lèi)鈣粘蛋白CS2抗體 CLSTN2
茶葉維生素U(S-Methylmethionine)比色法定量檢測試劑盒
人球蛋白M(IgM)elisa檢測試劑盒
大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)elisa檢測試劑盒
磷酸化轉錄接頭蛋白EP300抗體
phospho-Ep300
(Ser89)
卷曲螺旋結構域蛋白43抗體
CCDC43