操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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HT-29 (HT29)人結腸癌細胞
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英文名稱(chēng)
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HT-29 (HT29):HT29
HT29
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分類(lèi)
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人細胞系
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貨號
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XG-X3360
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組織來(lái)源
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結直腸腺癌
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形態(tài)
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上皮細胞樣
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生長(cháng)特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養方案A（默認）
生長(cháng)培養基:
McCoy’s 5A＋10% FBS＋1% P/S
培養條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來(lái)源文獻)
背景描述 HT-29細胞是由J·Fogh在1964年用移植培養方法和含15%FBS的F12培養液從原發(fā)性腫瘤分離的；近來(lái)，已建株的培養細胞用含相同血清McCoy's5A培液培養。HT-29細胞在裸鼠中致瘤，也能在類(lèi)固醇處理的地鼠中致瘤。HT-29細胞合成IgA、CEA、蛋白綁定TGF-β的分泌成分和粘液素等。
年齡（性別） 女性；44歲
組織來(lái)源 結直腸腺癌
細胞類(lèi)型 腫瘤細胞
腫瘤類(lèi)型 腸癌細胞
生物等級 BSL-1
倍增時(shí)間 ~36-60 hours
致瘤性 Yes, in nude mice; forms well
differentiated adenocarcinoma consistent with colonic primary (grade I); tumors
also form in steroid treated hamsters.
受體表達情況 human adrenergic alpha2A,
urokinase receptor (u-PAR), vitamin D (moderate expression), urokinase receptor
(u-PAR); vitamin D (moderate expression), human adrenergic alpha2A
基因表達情況 secretory component of IgA;
carcinoembryonic antigen (CEA); transforming growth factor beta binding
protein; mucin, myc+; ras+; myb+; fos+; sis+; p53+; abl -; ros -; src -, Blood
Type A; Rh+; HLA A1, A3, B12, B17, Cw5, HT-29 cells are negative for CD4, but
there is cell surface expression of galactose ceramide (a possible alternative
receptor for HIV).
保藏機構 ATCC; HTB-38 BCRJ; 0111 CCLV;
CCLV-RIE 0960 DSMZ; ACC-299 ECACC; 91072201
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
顆粒溶素抗體 GNLY
辣根過(guò)氧化物酶標記的脫氧核糖核酸酶γ抗體 DNase gamma,
HRP conjugated
AF750標記的ADCK1蛋白抗體 ADCK1, Alexa Flour
750 conjugated
APC-Cy5.5標記小鼠CD45R單克隆抗體 mouse
CD45R/APC-Cy5.5
硒結合蛋白1抗體 Selenium Binding Protein 1
細胞角蛋白19，17，14，42，10抗體
TATA盒結合蛋白相關(guān)因子1樣蛋白抗體 TAF1L
T細胞凋亡相關(guān)蛋白TDAG51抗體 PHLDA1
清道夫受體B1+B2抗體 Scavenger Receptor BI + BII
染色質(zhì)修飾蛋白1B抗體 CHMP1B
HAUS5蛋白抗體 HAUS5
INTS4蛋白抗體 INTS4
孕受體β（MPRβ）抗體 Progestin Receptor Beta
著(zhù)絲粒ZWILCH蛋白抗體 ZWILCH
復制激活因子C2抗體 RFC2
鈣依賴(lài)膜結合蛋白Copine蛋白7抗體 CPNE7
冰凍切片組織ER BETA 蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒
HT-29
(HT29)人結腸癌細胞大鼠整合素α2+β1(ITGA2+ITGB1)elisa檢測試劑盒
環(huán)境副傷A（Salmonella
Paratyphi A）定性基因檢測試劑盒
小鼠γ氨基丁酸(GABA)自身抗體IgG elisa分析檢測試劑盒
人EB病毒衣殼抗原(EBVCA)抗體(IgG)elisa檢測試劑盒
組織CASEIN KINASE 1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
小鼠去甲腎上腺素(NA)elisa分析檢測試劑盒
大鼠含球蛋白樣環(huán)和上皮生長(cháng)因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)elisa分析檢測試劑盒
大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)elisa分析檢測試劑盒
小鼠過(guò)氧化氫酶(CAT)elisa檢測試劑盒
昆蟲(chóng)總蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T
石蠟切片結締組織（CONNECTIVE TISSUE）改良格莫瑞三色（MGT） 染色試劑盒
K1826蛋白抗體
K1826
APS抗體
APS