操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
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英文名稱(chēng)
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DLD-1:DLD1
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貨號
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XG-X3286
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分類(lèi)
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人細胞系
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種屬
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人
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生長(cháng)特性
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貼壁細胞
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細胞形態(tài)
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上皮細胞樣
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組織來(lái)源
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結直腸腺癌上皮細胞
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用途
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僅供科研研究實(shí)驗
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生長(cháng)特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養方案A（默認）
生長(cháng)培養基:
RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
培養條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來(lái)源文獻)
背景描述 DLD-1細胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結直腸腺癌細胞株中的一株。在ATCC和其它地方進(jìn)行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細胞與HCT-15細胞相似，說(shuō)明這兩者是來(lái)自同一個(gè)人的不同克隆。DLD-1細胞和HCT-15細胞的遺傳起源可通過(guò)DNA指紋鑒定證實(shí)，但染色體組型分析顯示它們缺乏染色體標記一致改變或數目上一致改變。DLD-1細胞的CSAp陰性(CSAp-)，p53抗原表達呈陽(yáng)性(p53抗原產(chǎn)生了一個(gè)C→T點(diǎn)突變導致241位的Ser→Phe)。DLD-1細胞角蛋白過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達呈陽(yáng)性，癌基因N-myc的表達未做檢測。DLD-1細胞表達腫瘤特異性核基質(zhì)蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1細胞代數不明且污染了支原體，其后經(jīng)過(guò)12周多種聯(lián)合培養處理，處理之后每周用Hoechst染色和標準培養法檢測。其后連續11個(gè)月不加培養，DLD-1細胞所有的檢測呈陰性。
年齡（性別） 男性；
組織來(lái)源 結直腸腺癌上皮細胞
細胞類(lèi)型 腫瘤細胞
腫瘤類(lèi)型 腸癌細胞
生物等級 BSL-1
倍增時(shí)間 ~24-48 hours
致瘤性 Yes, in nude mice (Tumors
developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated
subcutaneously with 1×10^7 cells).
抗原表達情況 Blood Type O.The cells are
weakly positive for keratins and vimentin.The cells are positive for keratin by
immunoperoxidase staining.DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression
(the p53 antigen produced has a C -> T
基因表達情況 carcinoembryonic antigen
(CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3.
保藏機構 ATCC; CCL-221 BCRC; 60132
DSMZ; ACC-278 ECACC; 90102540
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
蘇丹紅elisa分析檢測試劑盒
Sudan red ELISA kit
人白介素25(IL-25)elisa分析檢測試劑盒
IL-25ELISAkit
空調清潔劑
小鼠不對稱(chēng)二甲基精氨酸(ADMA)elisa檢測試劑盒
鴿子白蛋白(Albumin)elisa分析檢測試劑盒
植物結構域重排甲基轉移酶（Domain Rearranged
Methylase；DRM）活性酶連續循環(huán)比色法定量檢測試劑盒
ORC5L蛋白抗體
ORC5L
鹵酸脫鹵酶樣水解酶域內含蛋白1A抗體
HDHD1A
金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（N端） Anti-TIMP-1(NT)
血小板源性生長(cháng)因子受體A抗體(PDGFRα) Anti-PDGFRA
磷酸化酶β抗體 Anti-PHKB
溶質(zhì)載體家族蛋白22成員5抗體 Anti-Slc22a5
Cy5.5標記的小鼠抗人IgM
DLD-1人結直腸腺癌細胞Mouse
Anti-Human IgM / Cy5.5
FBXL16蛋白抗體
FBXL16
人C4結合蛋白(C4BP)elisa分析檢測試劑盒
HumanC4BPELISAKit
小鼠磷脂酶A2(PL-A2)elisa分析檢測試劑盒
PL-A2ELISAKit
大鼠P物質(zhì)(SP)elisa分析檢測試劑盒
Rat Substance P ELISA
Kit
人骨涎蛋白(BSP)elisa分析檢測試劑盒
BSPELISAKit
HMGCLL1蛋白抗體
HMGCLL1
錨蛋白重復結構域蛋白40抗體
ANKRD40