操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
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英文名稱(chēng)
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D283 Med:D283 Med
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貨號
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XG-X3280
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分類(lèi)
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人細胞系
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種屬
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人
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生長(cháng)特性
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半貼半懸
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細胞形態(tài)
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上皮細胞樣
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組織來(lái)源
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腦組織
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用途
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僅供科研研究實(shí)驗
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生長(cháng)特性 半貼半懸
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
生長(cháng)培養基 MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養條件
氣相：空氣，95%；CO?，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 D283 Med細胞是由Frien等人于1985年建系，源自一名6歲患有神經(jīng)管細胞瘤有腹腔轉移的白人男性小孩的腹水細胞。
年齡（性別） 男；6歲
組織來(lái)源 腦組織
細胞類(lèi)型 腫瘤細胞
腫瘤類(lèi)型 成髓瘤細胞
生物等級 1
倍增時(shí)間 ~52 hours
致瘤性 Yes, in nude mice(The cells
form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.)Yes, in soft
agar
基因表達情況 The cells produce tumors in
nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron
specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100
(S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical
markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine
kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity)
保藏機構 ATCC; HTB-185IZSLER; BS TCL
203KCB; KCB 2010201YJ
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
胞質(zhì)動(dòng)力蛋白輕鏈中間體1抗體 DNCLI1
補體因子H重組兔單克隆抗體 CFH
線(xiàn)粒體乙?；?span>3抗體 [KO驗證抗體] SIRT3
心肌營(yíng)養素1抗體 CT-1
磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體 Phospho-PKC gamma (Thr514)
磷酸化緊密連接蛋白6抗體 phospho-Claudin 6 (Tyr219)
CD44v7抗體 CD44v7
CXXC型鋅指蛋白4抗體 CXXC4
核仁蛋白9抗體 NOL9
核轉錄因子YB抗體 NFYB
軸突生長(cháng)誘向因子G1/神經(jīng)突起生長(cháng)導向因子G1抗體 Netrin-G1
轉錄因子HES-1抗體 HES1
少突膠質(zhì)細胞轉錄因子1抗體 OLIG1
神經(jīng)細胞蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN3抗體 CLN3
MTO1蛋白抗體 MTO1
O-唾液酸糖蛋白內肽酶抗體 OSGEP
大鼠白介素2可溶性受體β鏈(sIL-2Rβ)elisa檢測試劑盒
D283 Med人腦髓母細胞瘤細胞小鼠降鈣素(CT)elisa分析檢測試劑盒
蘋(píng)果酸含量測試盒
酵母甘肽過(guò)氧化物酶（GSH PX）活性比色法定量檢測試劑盒
脂肪酶（LPS)測試盒
大鼠糖原磷酸化酶工酶II(GP-II)elisa檢測試劑盒
植物葉綠體總蛋白定量檢測試劑盒
線(xiàn)粒體呼吸鏈復合物 Ⅴ 活性測試盒 20管/10樣
生化法
人補體C1q（C1q）elisa檢測試劑盒
血液磷酸二酯酶（PDE）總活性熒光定量檢測試劑盒
小鼠糖皮質(zhì)受體β(GR-β)elisa分析檢測試劑盒
大鼠堿性磷酸酶(ALP)elisa檢測試劑盒
LYRM2蛋白抗體
LYRM2
細胞角蛋白15重組兔單克隆抗體
Cytokeratin 15