操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
|
英文名稱(chēng)
|
caki-1:caki1
|
貨號
|
XG-X3265
|
|
分類(lèi)
|
人細胞系
|
種屬
|
人
|
|
生長(cháng)特性
|
貼壁細胞
|
細胞形態(tài)
|
上皮細胞樣
|
|
組織來(lái)源
|
腎透明細胞癌皮膚轉移
|
用途
|
僅供科研研究實(shí)驗
|
生長(cháng)特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
生長(cháng)培養基 McCoy's 5A＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 Caki-1細胞的超微結構中包含許多微絨毛、少許微絲、許多小線(xiàn)粒體、充分發(fā)育的高爾基體、內質(zhì)網(wǎng)、許多脂滴和多層體，次級溶酶體；目前，沒(méi)有在Caki-1細胞內發(fā)現病毒顆粒。
年齡（性別） 男；49歲
組織來(lái)源 腎透明細胞癌皮膚轉移
細胞類(lèi)型 腫瘤細胞
腫瘤類(lèi)型 腎癌細胞
生物等級 1
倍增時(shí)間 ~40-60 hours
致瘤性 Yes, in nude mice; forms clear
cell carcinoma in nude mice consistent with renal primary; also forms tumors in
steroid treated hamsters.
抗原表達情況 Blood Type O; Rh-; HLA A9,
B12, Bw35
保藏機構 ATCC; HTB-46 DSMZ;
ACC-142DSMZ; ACC-731
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
四分子交聯(lián)體5/四旋蛋白5/四次跨膜蛋白5抗體 TSPAN5
糖蛋白β-1B抗體 Hemopexin
PRDM10k單克隆抗體 PRDM10
RASL11B蛋白抗體 RASL11B
20號染色體開(kāi)放閱讀框100抗體 GCX1/C20orf100
3號染色體開(kāi)放閱讀框38抗體 C3orf38
肌球蛋白1H抗體 MYO1H
畸形表皮自調節因子1抗體 Deformed Epidermal Autoregulatory Factor 1
血管內皮生長(cháng)因子受體2抗體 VEGFR2
巖藻糖轉移酶8抗體 FUT8
蛋白酶體抑制劑亞基PI31抗體 PSMF1
凋亡相關(guān)蛋白2重組兔單克隆抗體 PDCD2
FC段γ受體3/球蛋白G Fc段受體III單克隆抗體 CD16
FITC標記小鼠CD49e單克隆抗體 mouse/rat
CD49e/FITC
磷脂酰肌醇激酶3催化亞單位3抗體 PI 3 Kinase Class 3
球蛋白D重鏈保守區抗體 IGHD
大鼠3氧代5α類(lèi)固醇4脫氫酶2(SRD5A2)elisa分析檢測試劑盒
caki-1人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞小鼠成神經(jīng)細胞瘤RAS 病毒(v-ras)癌基因源物elisa檢測試劑盒
原果膠含量測試盒
通用型RFLP基因分析試劑盒
小鼠胃泌素(GAS)elisa檢測試劑盒
大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)elisa分析檢測試劑盒
組蛋白脫乙?；?span>5（HDAC5）活性比色法定量檢測試劑盒