操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長(cháng)期的細胞(貼壁細胞消化下來(lái)離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時(shí)間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長(cháng)期保存

方法二:使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無(wú)需自己配制,無(wú)需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
英文名稱(chēng)
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BCL2 Jurkat
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貨號
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XG-X7433
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分類(lèi)
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人細胞系
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種屬
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人
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生長(cháng)特性
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懸浮生長(cháng)
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細胞形態(tài)
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母細胞樣
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組織來(lái)源
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外周血
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用途
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僅供科研研究實(shí)驗
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種屬來(lái)源;人
組織來(lái)源;外周血
性別年齡;男性,14歲
生長(cháng)特性;懸浮生長(cháng)
細胞形態(tài);母細胞樣
細胞規格;1 X 106cells/T25或1 mL凍存管
培養條件;RPMI 1640 + 10% fetal bovine
serum (FBS) + 200 mcg/mL G418 + 1%P/S37 ℃, 5% CO2
凍存條件;90% FBS + 10% DMSO
傳代方法;維持培養細胞濃度在1 × 105~1 × 106個(gè)活細胞/mL之間, 2-3天傳1代
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
一氧化氮合酶轉運誘導抗體
NOSTRIN
通用轉錄因子III/WBSCR11抗體
GTF2IRD1
酪蛋白硫酸轉移酶1抗體 Anti-TPST1
細胞色素P450 1A2抗體 Anti-P450 1A2/CYP1A2
磷酸化蛋白激酶C nu型抗體 Anti-phospho-PRKD3(Ser41)
亞砷鹽相關(guān)蛋白抗體 Anti-Spindly/CCDC99
磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3
Phospho-FLT3
(Tyr591)
嗅覺(jué)受體5B3抗體
OR5B3
WD重復蛋白16抗體 Anti-WDR16
膜磷脂轉移蛋白1抗體 Anti-NIR2
RET指蛋白樣2/3抗體 Anti-RFPL2/RFPL3
SCK蛋白抗體 Anti-SHC2/Sck
大鼠β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)elisa分析檢測試劑盒
BCL2
Jurkat兒童急性T**細胞白血病細胞ITG β2/CD11+CD18
Elisa Kit
人核糖體蛋白S25(RPS25)elisa分析檢測試劑盒
RPS25ELISAkit
豬熱休克蛋白40(HSP-40)elisa檢測試劑盒
大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養因子(CNTF)elisa檢測試劑盒
動(dòng)物細胞鈉/鉀ATP酶(Na+/K+ -ATPase)活性比色法
人水通道蛋白-4(AQP4)elisa檢測試劑盒
LIN37蛋白抗體
LIN37
環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲(chóng))抗體
CSP
甲基化樣蛋白2B抗體
METTL2B
細胞質(zhì)分裂付出蛋白4抗體
DOCK4