細胞特性
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英文名稱(chēng)
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AAV-293:AAV293
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貨號
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XG-X3235
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分類(lèi)
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人細胞系
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種屬
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人
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生長(cháng)特性
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貼壁細胞
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細胞形態(tài)
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上皮細胞樣
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組織來(lái)源
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腎；以腺病毒5DNA進(jìn)行轉化
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用途
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僅供科研研究實(shí)驗
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生長(cháng)特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
生長(cháng)培養基 DMEM＋10%
FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項 該細胞貼壁松散，操作時(shí)請盡量輕柔；換液時(shí)需預熱培養基；收貨如有大塊脫落的細胞團，為正?，F象，請按照收貨注意事項處理。
背景描述 AAV-293細胞源自普遍使用的293 [HEK-293]細胞株，但AAV-293細胞產(chǎn)生的病毒滴度更高。293 [HEK-293]細胞是剪切過(guò)的腺病毒5型DNA轉染的人胚腎細胞。跟293 [HEK-293]細胞一樣，AAV-293細胞反式表達腺病毒E1基因，當共轉染三個(gè)AAV助質(zhì)粒(一個(gè)含ITR的質(zhì)粒、pAAV-RC和E1缺失助質(zhì)粒)時(shí)，AAV-293細胞可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關(guān)病毒顆粒；因此，我們推薦使用AAV-293細胞株繁殖腺病毒相關(guān)重組病毒。
年齡（性別） 胚胎
組織來(lái)源 腎；以腺病毒5DNA進(jìn)行轉化
細胞類(lèi)型 轉化細胞系
生物等級 2
保藏機構 NCBI_Iran; C548
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
鋅指蛋白77抗體 ZNF77
信號通路Wnt-5B抗體 WNT 5B
程序性細胞死亡6-相互作用蛋白重組兔單克隆抗體 PDCD6IP
單跨膜蛋白FOXRED1抗體 FOXRED1
EHM2蛋白抗體 EPB41L4B
FAM122B蛋白抗體 FAM122B
磷酸化水通道蛋白2抗體 phospho-AQP2 (Ser256)
磷酸化星形膠質(zhì)細胞PEA15抗體 Phospho-PEA15 (Ser116)
組織相容性抗原DQB1抗體 HLA DQB1
1號染色體開(kāi)放閱讀框122抗體 C1orf122
環(huán)氧合酶2/前列腺素內過(guò)氧化物合成酶2抗體 Cyclooxygenase 2
活化轉錄因子7相互作用蛋白1抗體 MCAF1
Pellino 2蛋白抗體 Pellino 2
PE標記人IL-10單克隆抗體 human IL-10/PE
生長(cháng)分化因子15/巨嗜細胞抑制因子1單克隆抗體 GDF15
絲裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗體 MAP4K6
倉鼠γ干擾素(IFNG)elisa分析檢測試劑盒
AAV-293人胚腎細胞小鼠促性腺釋放(GnRH)elisa分析檢測試劑盒
順烏頭酸含量測試盒
冰凍切片組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB完全間接檢測試劑盒
小鼠信號素3E(SEMA3E)elisa檢測試劑盒
大鼠抗增殖細胞核抗原(PCNA)抗體elisa檢測試劑盒
細胞二脂酰甘油（DAG）含量酶連續循環(huán)反應比色法
山羊阿黑皮素原(POMC)elisa分析檢測試劑盒
人6酮前列腺素(6-K-PG)elisa分析檢測試劑盒
酶（glutaminase）活性比色法（405）定量檢測試劑盒
小鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)elisa檢測試劑盒
大鼠兒茶酚胺（CA）elisa檢測試劑盒
白細胞介素17受體E抗體
IL17RE
COPA蛋白抗體
alpha COP I
操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。