A549+luc 人肺癌細胞熒光素酶標記

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細胞介紹

該細胞系由D.J.Griad通過(guò)肺癌組織移植培養建系，患者為58歲白人男性。A549能通過(guò)胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。

該細胞通過(guò)慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1） 來(lái)源：肺癌           

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，多角形；貼壁生長(cháng)

3） 含量：>1×10?  細胞數       

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝 

5） 用途：僅供科研使用

細胞誘導構建實(shí)驗步驟：

1.  轉染  （1）將A549細胞接種6孔板，每孔細胞數約為1×10? 個(gè)，

（2）天，細胞融合度為50%左右時(shí)用于病毒轉染，

（3）加入1mL培養基，再加20 μL Luciferase過(guò)表達慢病毒，

（4）混勻后繼續培養，

（5）12h后觀(guān)察細胞狀態(tài)，并更換為新鮮培養基，

（6）當細胞長(cháng)滿(mǎn)板底后，傳代至T25培養瓶中。

2.  篩選：用嘌呤霉素4ug/mL抗性篩選6周，穩轉細胞記作A549+Luc。

3. 體外熒光素酶活性檢測

細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：
如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
懸浮狀態(tài)下生長(cháng)的細胞，可以通過(guò)向培養瓶中添加完全培養基來(lái)維持細胞的生長(cháng)狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×10^6個(gè)/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長(cháng)。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3） 細胞凍存: 
收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

注意事項：

1.收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染。
2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)（視細胞密度而定）穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片，觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要后方能丟棄。

公司正在出售的產(chǎn)品：

p21激活激酶2抗體

PAK2

SEC63域內含蛋白1抗體

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甲基（）單克隆抗體

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A549+luc 人肺癌細胞熒光素酶標記Rat D-glyceraldehyde 3-phosphate ELISA Kit

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