操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。
細胞特性
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英文名稱(chēng)
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A375:A375
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貨號
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XG-X3226
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分類(lèi)
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人細胞系
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種屬
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人
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生長(cháng)特性
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貼壁生長(cháng)
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細胞形態(tài)
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上皮細胞樣
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組織來(lái)源
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皮膚；惡性黑色素瘤
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用途
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僅供科研研究實(shí)驗
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細胞別稱(chēng)：A375；人惡性黑色素瘤細胞；A 375; A375; A375-MEL; A375-mel; A375mel
種屬來(lái)源：人
年齡性別：女性，54歲
組織來(lái)源：皮膚；惡性黑色素瘤
生長(cháng)特性：貼壁生長(cháng)
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
背景簡(jiǎn)介：A375源自一位54歲女性，是Giard DJ等人建立的一系列細胞株中的一株。A-375細胞在抗胸腺細胞球蛋白、血清處理的NIH瑞士小鼠中形成類(lèi)似于惡性黑素瘤的快速增長(cháng)的皮下腫瘤；A-375在普通成纖維細胞和瓊脂上形成克隆。
生物等級：1
細胞規格：1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測：無(wú)
基因表達情況：
保藏機構：ATCC; CRL-1619 ATCC; CRL-7904
BCRC; 60039 BCRJ; 0278
培養基：90% DMEM+10% FBS+PS
培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲存
倍增時(shí)間：~24-32小時(shí)
STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X；CSF1PO：11，12；D13S317：11，14；D16S539：9；D18S51：12，17；D19S433：13，14.2；D21S11：29，30；D2S1338：16；D3S1358：15，17；D5S818：12；D7S820：9；D8S1179：11，14；FGA：23；TH01：8；TPOX：8，10；vWA：16，17；
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
p153蛋白抗體
p153
胞漿鈣獨立磷脂酶A2抗體
CaIPLA2
生精細胞凋亡相關(guān)基因4抗體 Anti-SRG4/TSARG4
帕金蛋白抗體 Anti-Parkin protein/PARK2
磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤樣蛋白p107抗體 Anti-phospho-p107(Thr369)
5-羥色胺受體1E抗體 Anti-5HT1E Receptor/SR-1E
磷酸化谷氨酸受體1抗體
phospho-NMDAR2A
(Ser1232)
早期B細胞因子2抗體
EBF2
鋅指蛋白346抗體 Anti-ZNF346
核基質(zhì)蛋白22 Anti-NMP-22
環(huán)指蛋白20抗體 Anti-RNF20
鈣結合樣蛋白/神經(jīng)腫瘤標記物抗體 Anti-SCGN/Secretagogin
大鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)elisa分析檢測試劑盒
A375人惡性黑色素瘤細胞Flt3 ELISA
Kit
人谷氨酸脫羧酶(GAD)elisa分析檢測試劑盒
GADELISAKit
維生素B12比色法定量檢測試劑盒
甘油含量測試盒測定液體樣本 300T 微量酶標法
大鼠生長(cháng)分化因子3(GDF3)elisa檢測試劑盒
冰凍切片蛋白氧化（羰基化；carbonyl）染色測定試劑盒
LYSMD3蛋白抗體
LYSMD3
11號染色體開(kāi)放閱讀框74抗體
C11orf74
羥類(lèi)固醇脫氫酶17β2抗體
HSD17B2
天青素/肝素結合蛋白抗體
Azurocidin