MDA-MB-435S細胞保存

公司來(lái)源可靠（源于A(yíng)TCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學(xué)實(shí)驗等提供全程服務(wù)。我司擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項目解決方案以及實(shí)驗服務(wù)。本產(chǎn)品僅能用于科研

產(chǎn)品詳細　乳腺導管癌細胞；MDA-MB-435S

形態(tài)特性　紡錘形

生長(cháng)特性　貼壁生長(cháng)

特征特性 MDA-MB-435S是一種紡錘形的細胞，1976年由其親本(435)中篩選得到。435是從31歲的轉移性乳腺導管腺癌女性患者胸水中分離得到。當用熒光染料對微管蛋白進(jìn)行染色時(shí)親本細胞顯現散布特征(II型)。近通過(guò)cDNA陣列研究表明，親本(MDA-MB-435)可歸入黑素瘤起源。

培養條件 L15: Leibovitz Medium  10%FBS

傳代方法　消化CQ-5分鐘，1:2,3天內可長(cháng)滿(mǎn)

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進(jìn)行培養，如無(wú)法立刻進(jìn)行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養瓶充滿(mǎn)完全培養基后進(jìn)行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

培養方法：
收到后，在倒置顯微鏡下觀(guān)察整個(gè)細胞生長(cháng)情況：
如果細胞未長(cháng)滿(mǎn)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶后放到超菌臺內，嚴格無(wú)菌操作，打開(kāi)細胞培養瓶，留10ml培養液繼續培養。
如果細胞已長(cháng)滿(mǎn)（達80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具體步驟如下：
a，棄去培養液，用PBS洗1-2次。
b，向瓶?jì)燃尤?.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。
c，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養
d，傳代比例：1:2-1:3

培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過(guò)夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過(guò)夜）。天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。      
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
小鼠轉化生長(cháng)因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  n-Butyl-β-D-fructopyranoside  中文名：  分子式：C10H20O6  度：%

小鼠轉化生長(cháng)因子β1(TGF-β1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Ethopabate 1959/6/3  中文名：乙氧酰胺苯甲酯  分子式：C12H15NO4 

小鼠轉化生長(cháng)因子-β1   英文名稱(chēng)：   Ttansforming Growth Factor -β1   規格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   TGF-β1  n-Butyl β-D-fructofuranoside  中文名：基-β-D-果糖苷  分子式：C10H20O6  度：97.0%

小鼠轉化生長(cháng)因子α(TGF-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  n-Butyl-β-D-fructopyranoside  中文名：  分子式：C10H20O6 

小鼠轉化生長(cháng)因子α(TGF-α)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  L-Aspartic acid  中文名：L-天門(mén)冬氨酸  分子式：C4H7NO4
稻瘟靈 10 ng/ml 標準品 Lufenuron  10ng/ul于環(huán)己烷,10ML 特征形態(tài) 液態(tài)

Isoprothiolane,10ng/ul 標準品 Linuron  10ng/ul于乙腈,10ML 特征形態(tài) 液態(tài)

1-(4-Isopropylphenyl)urea,10ng/ul 標準品 Linolenicacid-methylester  10ng/ul于乙腈,10ML 特征形態(tài) 液態(tài)
Carbofuran-3-hydroxy,10ng/ul 標準品 4-Chloro-2-nitroaniline  10ng/ul于乙酸乙酯,10ML 特征形態(tài) 液態(tài)

Carbetamide,10ng/ul 標準品 Chloroneb  10ng/ul于乙腈,10ml 特征形態(tài) 液態(tài)

甲萘威，10ng/ul于環(huán)己烷 標準品 4-Chloro-2-methylaniline  10ng/ul于環(huán)己烷,10ML 特征形態(tài) 液態(tài)
對蝦傳染性肌肉壞死病毒(IMNV)RNA恒溫核酸檢測試劑盒（不含提?。?span>24T/48TNandrolone undecylate8629十一酸諾龍

對蝦桃拉綜合癥病毒（TSV）RNA恒溫核酸檢測試劑盒（不含提?。?span>24T/48TNandrolone phenylpropionate6苯諾龍

對蝦副溶血性弧菌恒溫核酸檢測試劑盒（免提?。?span>24T/48TNandrolone laurate2641月桂酸諾龍

蝦肝腸胞蟲(chóng)(EHP)恒溫核酸檢測試劑盒（免提?。?span>24T/48TNandrolone decanoate30癸酸諾龍

對蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）DNA恒溫核酸檢測試劑盒24T/48TN-Aminophthalimide18758N-氨基
MDA-MB-435S細胞保存操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存：
1.2.1細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精后打開(kāi),吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶?jì)?，?7℃、5％co2及飽和濕度下培養。
1.2.2細胞傳代 原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長(cháng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀(guān)察 在倒置顯微鏡下觀(guān)察并記錄細胞的生長(cháng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀(guān)察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長(cháng)期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個(gè)25cm2培養瓶中，每?jì)尚r(shí)隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長(cháng)曲線(xiàn) 取指數生長(cháng)期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d，繪制細胞生長(cháng)曲線(xiàn)。

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