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產(chǎn)品名稱(chēng)：輔酶ⅠNAD(H)比色法檢測試劑盒100管/48樣
規格 : 50管/24樣
測試方法:可見(jiàn)分光光度法
商品介紹：
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測定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要氫受體，**的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
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特點(diǎn)：
1、優(yōu)化設計的實(shí)驗方案，1小時(shí)即可完成
2、靈敏度高，操作便捷
3、試劑盒提供檢測果糖所需的全套試劑
常見(jiàn)樣本處理方法：
1、血清（漿）樣品：直接檢測。
2、細胞或組織樣品的制備： 培養細胞：先收集細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細胞數量
（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議 500萬(wàn)細胞加入 1mL提取液） ，超聲波破碎細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲 3s，間隔10s，重復30 次）8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g） ：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g組織，
加入 1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
實(shí)驗通用規則：
1、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(cháng)期保存。
2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動(dòng)功能。
3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。
4、檢測前，要打開(kāi)酶標儀，使之穩定10分鐘以上。
5、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
6、將液體加到酶標孔中時(shí)，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì )自然流下去。
7、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。
8、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒(méi)有洗板機時(shí)，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。
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測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時(shí)間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗臺上，以便 不時(shí)觀(guān)察，待對照管顯色適當時(shí)，即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應步驟，但卻 是決定實(shí)驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結合的物質(zhì)以及在反應過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。