- 如果您對該產(chǎn)品感興趣的話(huà)，可以
- 產(chǎn)品名稱(chēng)：甲型流感病毒試劑盒熒光PCR法?
- 產(chǎn)品型號：XG-R63210?
- 產(chǎn)品展商：西格
- 產(chǎn)品文檔：無(wú)相關(guān)文檔
簡(jiǎn)單介紹
甲型流感病毒試劑盒熒光PCR法?保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品描述
產(chǎn)品特點(diǎn):
靈敏度高：可檢測個(gè)位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實(shí)驗結果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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甲型流感病毒試劑盒熒光PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63210
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儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過(guò)程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實(shí)驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
小鼠血管抑素(mouse Angiostatin) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠載脂蛋白E(mouse APO E) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠B細胞刺激因子(mouse BAFF) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠凋亡因子BAX(mouse BAX) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠細胞凋亡相關(guān)基因(mouse BCL-2) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠腦衍化神經(jīng)營(yíng)養因子(mouse BDNF) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠腦衍化神經(jīng)營(yíng)養因子受體(mouse BDNF R) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠骨成型蛋白-2(mouse BMP-2) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠骨成型蛋白-4(mouse BMP-4) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠骨成型蛋白受體1A(mouse BMP-R1A) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(mouse BMP-R2) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠腦鈉肽(mouse BNP) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
芳香胺N-乙?；D移酶抗體
腺苷酸環(huán)化酶8抗體
腺苷酸環(huán)化酶10抗體
腺苷酸環(huán)化酶5抗體
腺苷酸環(huán)化酶6抗體
腺苷酸環(huán)化酶9抗體
肌萎縮側索硬化癥相關(guān)蛋白2抗體
三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體
β淀粉樣蛋白前體結合蛋白B-1抗體
內收蛋白a1抗體
α2纖溶酶色素上皮衍生因子抗體
膜粘連蛋白7抗體
早老素γ分泌酶抗體
鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體
Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗體
磷酸化Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗體
去整合素樣金屬蛋白酶9抗體
艾滋病病毒制約錨定蛋白抗體
腺苷酸環(huán)化酶1抗體
核糖核酸酶L抑制蛋白抗體
Rho GTP酶激活蛋白24抗體
甲型流感病毒試劑盒熒光PCR法GTP酶激活蛋白ASAP3抗體
激活素受體1C抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶13型抗體
去整合素樣金屬蛋白酶11抗體
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。