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PCR技術(shù)DNA變性簡(jiǎn)述

DNA變性是指核酸雙螺旋結構中堿基對的氫鍵斷裂,使得雙鏈變?yōu)閱捂湹倪^(guò)程。


對雙鏈DNA進(jìn)行加熱可以使其發(fā)生變性,當溫度升高到一定高度時(shí),DNA在260nm處的吸光度會(huì )突然發(fā)生明顯的上升,并達到zui大值,之后溫度繼續上升,其吸光度也不會(huì )發(fā)生明顯變化,若以溫度對DNA溶液的260nm吸光度做圖,會(huì )得到典型的DNA變性S型曲線(xiàn)。


DNA的變性是在一個(gè)很窄的溫度范圍內發(fā)生的,通常將核酸加熱變性過(guò)程中,紫外光吸收值達到zui大值50%時(shí)的溫度稱(chēng)為核酸的熔解溫度 (Tm, melting temperature)。


1、特定核酸分子的Tm值與其G+C含量成正相關(guān),GC% = (Tm-69.3) × 2.44;

2、Tm值的大小還與核酸分子的長(cháng)度有關(guān),核酸分子越長(cháng),Tm值越大;

3、粒子強度越高,熔解溫度越高,熔解溫度范圍越窄。

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