細胞衰老檢測方法與步驟

細胞衰老檢測方法與步驟：
（1）、細胞接種前在6孔培養板中預先放置滅 菌的細胞片，每孔加入1×10E5個(gè)細胞，37℃ 5% CO2條件下培養過(guò)夜，使細胞在細胞片上生長(cháng)。
（2）、在超凈工作臺中吸棄6孔培養板中的培養液，加入×1 PBS，洗滌細胞1次，隨后加入2%甲醛/0.2%C5H8O2固定液，室溫條件下固定3~5分鐘。
（3）、吸棄2%甲醛/0.2%C5H8O2固定液，加入×1 PBS，洗滌細胞3次，每次3分鐘。
（4）、吸棄×1 PBS，加X-Gal溶液以浸沒(méi)細胞片為宜，37℃孵育4~8小時(shí)或過(guò)夜，用保鮮膜包被6孔培養板以防染液蒸發(fā)。
（5）、取出細胞爬片，去離子水沖洗2次，再次用固定液固定4分鐘，流水輕輕沖洗。
（6）、將細胞爬片按此順序脫水、透明∶95%酒精I（2分鐘）→95%酒精Ⅱ（2分鐘）→100%酒精I（2分鐘）→100%酒精I（5分鐘）→C₈H₁₀I（2分鐘）→C₈H₁₀Ⅱ（2分鐘）。
（7）、中性樹(shù)膠封片。
（8）、在普通光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察衰老細胞形態(tài)。
每張片子鏡下計數400個(gè)細胞，確定X-Gal染色陽(yáng)性細胞（衰老細胞）在細胞群體中的所占的百分比即衰老細胞率（藍染細胞數/總計細胞數×100%）。
細胞衰老檢測注意事項：
（1）、X-Gal溶液需要現用現配。
（2）、細胞固定時(shí)間過(guò)長(cháng)或固定之后清洗不干凈，均會(huì )影響后續的酶反應。