實(shí)驗細胞常用的染色操作：
1、消化收集細胞，以2-10×103 cell/coverslip 接種細胞于24孔板中，滴加細胞懸液50-100μl，2小時(shí)后補加10%FBS+DMEM500μl
2、37℃細胞培養箱中培養48小時(shí)后，顯微鏡下觀(guān)察，取細胞狀態(tài)和細胞數量適應的玻片做染色。
3、去掉舊培養液，用冰冷的PBS洗兩次，加3.7-4%甲醛0.5ml(in PBS)室溫固定10min
4、PBS洗兩次，加穿膜液0.5ml(0.1%triton X-100+0.1M Gycine)冰上30min
5、PBS洗兩次，加5mg/ml BSA 0.3ml室溫封閉1小時(shí)。
6、PBS洗兩次，取一張封口膜，做好標記，加一抗(用5mg/ml BSA稀釋1：50-100)25μl于封口膜上，將蓋玻片細胞面朝下反扣在一抗液滴上，放在濕盒中室溫孵育1-3小時(shí)，將蓋玻片從封口膜上小心夾起，細胞面朝上放入原來(lái)的24孔板中，PBS洗兩次，取另外一張封口膜，做好標記，加二抗(羊抗兔羅丹明，用5mg/ml BSA稀釋1：50-100）25μl于封口膜上，將蓋玻片細胞面朝下反扣在一{二}抗液滴上，放在濕盒中室溫黑暗中孵育1-3小時(shí)
7、同上PBS洗兩次，同上操作，將玻片與10μl DAPI （1μg/ml in PBS，貯存液：1mg/ml in dd H2O）室溫孵育1-5min.
8、PBS 洗三次，將玻片背面的水分擦干，封片于載玻片上，做好標記（時(shí)間，細胞名稱(chēng)，實(shí)驗內容，號碼）
9、待封片膠干后可在熒光顯微鏡下觀(guān)察，觀(guān)察時(shí)注意記錄每張玻片的內容以免混淆，觀(guān)察完后將玻片放-20℃保存。
10、若只觀(guān)察轉染了EYFP的熒光蛋白，不需要給內源蛋白染色，可直接用DAPI染核后封片。
11、以BSA (5mg/ml)代替一抗，二抗照加為染色的對照組，做法同上。為了保證實(shí)驗有重復性，每次做平行2組以上。