細胞穩轉株構建病毒法過(guò)程：
1、確定目標細胞系的相關(guān)信息，細胞的培養條件，細胞的增值速度，支原體污染情況；
2、 預實(shí)驗確定MOI值，可通過(guò)查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的MOI值也可參考查閱得到的數據，設計梯度實(shí)驗，摸索合適MOI；
3、 預實(shí)驗確定篩選藥 物用量，常用的藥 物篩選有：puro、G418、潮霉素等；
4、 細胞鋪板，將需要的細胞量接種于合適的培養皿中；
5、 細胞感染，通過(guò)接種的細胞量及預實(shí)驗得來(lái)的MOI來(lái)計算添加的病毒體積；
6、 撤病毒，第2天，一般不超過(guò)24h換液；
7、 轉染48h后選擇對應的抗性 藥 物進(jìn)行篩選；
8、 篩選結束后進(jìn)行單克隆化，選擇陽(yáng)性克隆進(jìn)行培養。