細胞貼壁是細胞(除腫瘤細胞外)在體外培養條件下,完成貼壁后均為單層生長(cháng),原因是貼壁細胞有接觸性抑制的特點(diǎn)。一般認為接觸抑制是細胞間的一種識別作用,對于動(dòng)物細胞的形態(tài)形成與穩定具有重要性的作用。由于貼壁細胞的一面是緊貼在培養瓶上的,如果其上方存在細胞與其相粘附,那么下方的細胞很快就會(huì )缺乏營(yíng)養餓死。
如何促進(jìn)細胞貼壁:
1. 適度消化細胞:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時(shí)間可適當放長(cháng),一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養基打散。
2. 用塑料瓶培養,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養瓶,或者用鹽酸對培養瓶進(jìn)行蝕刻,或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA,也可以幫助細胞貼附新的培養瓶,細胞不易貼壁,建議加多聚賴(lài)氨酸處理。
3. 正確配制消化液或培養液。
4. 使用合適的細胞外基質(zhì)或貼壁試劑。
5. 復蘇新的細胞,第1周用20%血清幫助細胞復原。
6. 傳代接種一定要鋪的均勻,避免細胞抱團生長(cháng)。
7. 細胞傳代24小時(shí)之內,不要晃動(dòng),以免影響貼壁。
8. 體內上皮細胞生長(cháng)在膠原構成的基膜上,因此培養在有膠原的底物上有利于生長(cháng)。人或小鼠表皮細胞培養,可以用γ射線(xiàn)照射后的3T3細胞為飼養層,另外降低pH、Ca2+含量和溫度,均有利于上皮細胞生長(cháng)。