外源性物質(zhì)經(jīng)常是由于用于ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被污染、標本貯存過(guò)久、標本凝集 不全和采血管中添加物等影響。
1、標本溶血
由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標記的 ELISA測定中，會(huì )導致非特異性顯色，干擾測定結果。為克服上述干擾作用，標本采集時(shí)必須注重避免溶血。
2、標本受細 菌污染
因菌體中可能含有內源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細 菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。
3、標本保存不當
在冰箱中保存過(guò)久的標本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、甚至造成 假陽(yáng)性；標本放置時(shí)間過(guò)長(cháng)（如1天以上），有時(shí)抗原或抗體免 疫活性減弱，亦可出現假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清 標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5天內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時(shí)應輕柔，不可強烈振蕩。
4、標本凝集不全
在沒(méi)有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開(kāi)始凝固，18~24h完全凝固。臨床檢驗工作中，有時(shí)為了爭取 時(shí)間快速檢測，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強行離心分離血清，此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過(guò)程中可以形成 肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結果；這類(lèi)情況于次日復查時(shí)因血凝已完全，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復查結果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用，解決的辦法是血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血 管中加入適當的促凝劑。
5、標本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑（如肝素，EDTA）、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA系統中辣根過(guò)氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
綜上所述，對臨床檢驗ELISA測定中出現的假陽(yáng)性或假陰性結果，在考慮試劑因素和操作因素之外，更多的應從標本因素方面進(jìn)行分 析，并應采取相應措施排除干擾作用，從而為臨床提供正確可靠的檢測結果。