競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：
1. 將具有專(zhuān)一性的抗體固著(zhù)于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗體
2. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結
3. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結，由于塑膠孔盤(pán)上固著(zhù)的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結的固著(zhù)抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤(pán)上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來(lái)。
4. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤(pán)內留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。
5. 當需要偵測無(wú)法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著(zhù)于孔盤(pán)上時(shí)，一般會(huì )考慮使用競爭法ELISA。
原理：將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。