當獲得多個(gè)雜交瘤細胞株時(shí),要了解哪一株是zui 適用的,則一定要通過(guò)各種鑒定。常見(jiàn)的六種鑒定單克隆抗體的性質(zhì)方法:
1、Ig類(lèi)型測定
通常以免抗小鼠Ig類(lèi)及亞類(lèi)抗體與培養液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴散法進(jìn)行測定,確定其Ig類(lèi)型或Ig亞類(lèi)型別。
2、特異性測定
把與相應抗原有關(guān)的物質(zhì)同McAb進(jìn)行多種免yi 學(xué)檢測,鑒定McAb的特異性。這直接關(guān)系到McAb應用的可靠性。
3、抗體效價(jià)測定
效價(jià)以腹腔積液或培養液的稀釋度表示,稀釋度越高,則抗體效價(jià)也越高。在凝集反應中,腹腔積液效價(jià)可達5萬(wàn)以上;在ELISA中,腹腔積液效價(jià)可達100萬(wàn)以上。如ELISA效價(jià)低于10萬(wàn),用于診斷測定將不會(huì )達到很高的敏感度,應重新制備。
4、表位測定
通過(guò)雙向瓊脂擴散法,把兩種McAb混合,加入于同一孔中,對孔放相應的抗原,如出現兩條沉淀線(xiàn)可證明兩者為抗不同表位的McAb;利用ELISA雙抗夾心法,將一種McAb作包被抗體,另一作酶標記,其中加入抗原,如顯色,則證明兩者抗不同的表位。
5、親和力測定
只有當抗原與抗體結合部位結構完全吻合時(shí),抗體的親和力。這種結合力以抗原抗體反應平衡時(shí),抗原與抗體濃度的乘積與抗原抗體復合物濃度之比表示。如親和力太低,會(huì )嚴重影響測定的敏感性。
6、染色體分析
正常鼠的脾細胞染色體數:40,全部為端著(zhù)絲粒;小鼠骨髓瘤細胞染色體:SP2/0細胞為62—68,NS-1為54~64。大多數為非整倍性,有中部和亞中部著(zhù)絲點(diǎn)。雜交瘤細胞的染色體數目接近兩親本細胞染色體數目的總和,在結構上多數為端著(zhù)絲粒染色體外.還應出現少數標志染色體。染色體數目多且較集中的雜交瘤細胞分泌高效價(jià)的抗體。