細胞凍存和復蘇的關(guān)鍵要點(diǎn)是慢凍快融。細胞凍存的效果主要與降溫步驟、凍存保護液的使用、凍存溫度、復溫速率及用于凍存的細胞生長(cháng)狀態(tài)有關(guān)。降溫速率過(guò)快容易引起細胞內冰晶損傷，所以為防止細胞內結冰必須采用一個(gè)“慢”的降溫過(guò)程，并使用凍存保護劑，即凍存液。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作保護劑。
根據降溫速度區分，細胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。傳統的凍存方法是將冷凍管置于4℃ 30分鐘、-20℃ 30分鐘、-80℃過(guò)夜再轉液氮。這種凍存方法步驟多，而且需要遵守幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)，容易被遺忘，對于繁忙的實(shí)驗人員而言不那么友好。而程序降溫方法，采用降溫速率-1℃～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min，再放至-196℃液氮保存。常規的程序降溫凍存方法較為復雜、費時(shí)，需要儀器設備花費較高，所以非程序降溫凍存方法便應運而生，它能大大簡(jiǎn)化凍存流程，細胞可直接置于-80°C冰箱完成凍存過(guò)程，更為簡(jiǎn)便高效。