熒光抗體染色直接法步驟:
1．染色
切片經(jīng)固定后，滴加經(jīng)稀釋至染色效價(jià)如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人 IgG或 IgA 熒光抗體等），在室溫或37℃染色30min，切片置入能保持潮濕的染色盒內，防止干燥。
2．洗片
傾去存留的熒光抗體，將切片浸入 pH7.4或 pH7.2PBS 中洗兩次，攪拌，每次5min，再用蒸餾水洗1min，除去鹽結晶。
3．用50%緩沖（0.5mol/L 碳酸鹽緩沖液 pH9.0～9.5）甘油封固、鏡檢
4．對照染色
①正常免熒光血清染色，如上法處理切片，結果應為陰性。
②染色抑制試驗（一步法）：將熒光抗體和未標記的抗體球蛋白或血清（相同）等量混合，如上法處理切片。結果應為陰性。
為證明此種染色抑制不是由于熒光抗體被稀釋所致，可用鹽水代替未標記抗血清，染色結果應為陽(yáng)性。此法結果較二步法穩定。
③類(lèi)屬抗原染色試驗，前面已作敘述。
直接法比較簡(jiǎn)單，適合做xi 菌、螺旋體、原蟲(chóng)、真jun 及濃度較高的蛋白質(zhì)抗原如腎、皮膚的檢查和研究。
此法每種熒光抗體只能檢查一種相應的抗原，特異性高而敏感性較低。