PCR反應出現假陽(yáng)性解析:
一、引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進(jìn)行PCR擴增時(shí),擴增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現假陽(yáng)性。需重新設計引物。
二、靶序列或擴增產(chǎn)物的交叉污染:這種污染有兩種原因:一是整個(gè)基因組或大片段的交叉污染,導致假陽(yáng)性。這種假陽(yáng)性可用以下方法解決:
1、操作時(shí)應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣器內或濺出離心管外。
2、除了酶及其他不耐高溫的物質(zhì)外,所有試劑或器材均應高壓消du。所用離心管及進(jìn)樣槍頭均應一次性使用。
3、必要時(shí),在加標本前,反應管和試劑用紫外線(xiàn)照射,以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸污染,這些小片段比靶序列短,但有一定的同源性??苫ハ嗥唇?,與引物互補后,可擴增出PCR產(chǎn)物,而導致假陽(yáng)性的產(chǎn)生,可用巢式PCR方法來(lái)減輕或消除。